Исследование потенциального риска заражения сифилисом через препараты крови
СтатьиОпубликовано в журнале:
Южно-Российский медицинский журнал »» № 3'98 М.Н. Гаджимурадов, С.М. Максудова, А.М. Аминов.
Центральный кожно-венерологический институт МЗ и МП РФ, Дагестанская государственная медицинская академия МЗ и МП РФ.
Из донорской крови производится целый ряд препаратов крови, среди которых только альбумины во время технологического цикла подвергаются термической обработке, достаточной для уничтожения бледной трепонемы [1, 3, 5, 6]. Помимо альбуминов, изготавливается большое количество препаратов, не подвергающихся такой обработке:
- криопреципитат;
- иммуноглобулины - антистафилококковый, антивирусный, противостолбнячный;
- иммуноглобулин против гепатита В, иммуноглобулин человека нормальный;
- сыворотки - антистафилококковая, антипротейная, антисинегнойная, антидифтерийная, антиэндотоксиновая;
- тромбин;
- интерферон внутривенного и интраназального применения;
- фибринолизин;
- фибриноген;
- биологический антисептический тампон и другие (S).
Технологический процесс производства названных препаратов крови предусматривает хранение консервированной плазмы в течение 30 суток при t = +4+/-2оС, а также воздействие 8о и 25о этиловым спиртом в течение 24 часов. Обработка происходит в кислой среде (используется уксусная кислота при рН=5,2). Предусматривается также 3-4 кратное замораживание (-20оС) и последующее оттаивание (до +8оС) материала, которое приводит к разрушению клеточных оболочек. Возможно, многие из этих факторов губительно влияют на бледную трепонему [4].
Проведено экспериментальное исследование, целью которого было установить влияние ряда технологических факторов, используемых при производстве препаратов крови, на жизнеспособность возбудителя сифилиса.
Подвижность и патогенность бледных трепонем штамма Никольса изучалась в условиях, максимально приближенных к производственным: в консервированной плазме, в спиртовом и уксусном растворах плазмы крови, а также при замораживании и оттаивании. Во все растворы добавляли взвесь бледных трепонем до содержания в каждом поле зрения 25-30 микроорганизмов.
Консервированную плазму (консервант "Глюгицир"), содержащую бледные трепонемы, хранили при t = +4+/-2оС в течение 30 суток.
Плазму крови с добавлением этилового спирта (8о) хранили 24 часа при t = -2оС. Кислый раствор плазмы крови (рН уксусной кислоты = 5,2) в течение 18 часов хранили при t = 0оС. Консервированную плазму с бледными трепонемами трижды замораживали (t = -20оС) и оттаивали.
Подвижность бледных трепонем в препаратах, приготовленных из вышеуказанных растворов, изучали в темном поле зрения микроскопа.
В результате микроскопического исследования установлено, что консервированная плазма крови к 5-му дню хранения при t = +4+/-2оС не содержит подвижных бледных трепонем, а на 22-е сутки в ней отсутствуют уже и неподвижные микроорганизмы (таблица 1). Хранение плазмы крови, содержащей бледные трепонемы с добавлением этилового спирта, приводит через полчаса к резкому снижению числа подвижных бледных трепонем (таблица 2). В препарате менее половины микроорганизмов подвижны, преобладают трепонемы с ротаторными движениями. К концу первого часа в каждом поле зрения микроскопа было до 3-4 вялоподвижных микроорганизмов, контрактильные движения отсутствовали. Отмечалось снижение числа бледных трепонем до 4-17 в каждом поле зрения. Микроорганизмы были утолщены и укорочены. Еще через час только единичные бледные трепонемы были вяло подвижны и, в основном, за счет ротаторных движений. Продолжалось снижение числа бледных трепонем до 11 в поле зрения микроскопа. Морфологические изменения были значительно выражены: укорочение, утолщение и разволокнение микроорганизмов. А через 2 часа 30 минут с момента начала эксперимента, подвижные бледные трепонемы отсутствовали в исследуемых препаратах и число микроорганизмов было снижено до 6-10 в поле зрения.
Таблица 1. Влияние сроков хранения плазмы консервированной крови на подвижность бледных трепонем.
| Дни наблюдения | Число трепонем | |
| подвижные | неподвижные | |
| 1 | 30 | - |
| 2 | 22 | 3 |
| 5 | - | 12 |
| 7 | - | 10 |
| 12 | - | 10 |
| 15 | - | 6 |
| 22 | - | - |
| 30 | - | - |
Таблица 2. Влияние 8о спиртового раствора на подвижность бледных трепонем.
| Время | Бледные трепонемы | |
| подвижные | неподвижные | |
| 1030 | 25 | - |
| 1100 | 8 | 16 |
| 1130 | 3 | 1 |
| 1230 | 1 | 10 |
| 1300 | - | 10 |
| 2300 | - | - |
Морфологические изменения представлены значительным укорочением, утолщением и разволокнением бледных трепонем.
Исследуемая кислая среда приводит к обездвиживанию бледных трепонем в течение 40 минут, а восемнадцатичасовое хранение в ней - к полному лизису трепонем (таблица 3). Из таблицы видно, что к началу исследования все бледные трепонемы были подвижны, преобладали ротаторные и сгибательные движения. Через 20 минут появилось до 16 неподвижных микроорганизмов, а количество подвижных уменьшилось до 9. Бледные трепонемы с контрактильными движениями отсутствовали, наблюдались микроорганизмы с ротаторными и сгибательными движениями. Еще через 20 минут во всех полях зрения микроскопа подвижные микроорганизмы отсутствовали, число неподвижных возросло. Та же микроскопическая картина сохранилась в течение следующих 20 минут. А к концу второго часа отмечалось снижение бледных трепонем до 12 в каждом поле зрения. Наблюдались морфологически измененные, укороченные и утолщенные микроорганизмы. Через 18 часов хранения в плазме бледные трепонемы отсутствовали. Данное наблюдение позволяет сделать вывод, что консервирование с уксусной кислотой (рН = 5,2) вызывает такие морфологические изменения бледных трепонем, которые приводят к их разрушению.
Таблица 3. Влияние уксусной кислоты на подвижность бледных трепонем, содержащихся в консервированной плазме крови.
| Время | Бледные трепонемы | |
| подвижные | неподвижные | |
| 1230 | 25 | - |
| через 20 минут | 9 | 16 |
| через 40 минут | - | 23 |
| через 1 час | - | 23 |
| через 2 часа | - | 12 |
| через 18 часов | - | - |
При двукратном замораживании (-20оС) и оттаивании консервированной плазмы крови, содержащиеся в ней бледные трепонемы теряют подвижность, при трехкратном - полностью разрушаются (таблица 4).
Таблица 4. Изменение подвижности бледных трепонем в плазме консервированной крови при трехкратном замораживании и оттаивании.
| Бледные трепонемы | Дни оттаивания | |||
| 1 | 7 | 14 | 21 | |
| подвижные | 30 | 4 | - | - |
| неподвижные | - | 9 | 3 | - |
При микроскопическом исследовании препарата из крови, хранившейся 7 суток при температуре -20оС, оказалось, что большинство бледных трепонем неподвижны, причем они укорочены и утолщены. До 4-х микроорганизмов в поле зрения микроскопа умеренно подвижны, в основном, за счет ротаторных движений. Отмечалось значительное уменьшение числа бледных трепонем относительно первоначальной концентрации.
При повторном оттаивании плазмы консервированной крови, хранившейся 14 суток при температуре -20оС, подвижные бледные трепонемы в ней отсутствовали. Отмечалось снижение числа бледных трепонем до 3 в каждом поле зрения. Морфологические изменения были значительно выражены: наблюдалось укорочение, утолщение и разволокнение микроорганизмов.
На 21-й день хранения содержимое колбы оттаивали в третий раз и готовили препарат для микроскопического исследования хранившихся замороженными в плазме бледных трепонем. Ни в одном поле зрения микроскопа микроорганизмы не обнаружены.
Учитывая теоретическую возможность сохранения измененных бледных трепонем (зерна, гранулы), было проведено изучение риска заражения полученных полуфабрикатов и готовых препаратов крови на 73 кроликах - самцах массой 2,5-3 кг, у которых серологические реакции на сифилис (КСР, РИТ и РИФ-200) были отрицательными. Каждому кролику вводили по 0,75 мл препарата внутрикожно с каждой стороны мошонки.
В течение 6 месяцев после инъекций кролики находились на клинико-серологическом контроле. Животных осматривали каждые 2 недели в течение первых 2 месяцев, затем - раз в месяц; кровь для исследования в КСР брали из краевой вены уха раз в месяц, в РИТ и РИФ-200 - раз в 3 месяца. После окончания наблюдения у кроликов удаляли подколенные лимфатические узлы и перевивали их здоровым кроликам 1-го пассажа, а от них через 6 месяцев наблюдения - кроликам 2-го пассажа. За пассажными кроликами проводили клинико-серологическое наблюдение; исходных кроликов и животных 1-го пассажа после удаления лимфатических узлов, а кроликов 2-го пассажа через 4-6 месяцев наблюдения заражали внутрикожно на мошонке взвесью патогенных бледных трепонем штамма Никольса с тем, чтобы убедиться в отсутствии у них скрытого сифилиса.
Все кролики удовлетворительно перенесли их введение. У одного животного, зараженного консервированной плазмой с патогенными бледными трепонемами, отмечалась отечность правого яичка, а на коже мошонки справа образовалась кровянисто-гнойная корка диаметром 0,5 см. На 2-м месяце отек регрессировал, корка отпала, на коже мошонки остался рубец диаметром 0,2 см. В последующие 4 месяца клинико-серологического наблюдения кролик оставался серологически здоров. Вышеописанная корка на коже мошонки была расценена как результат случайной травмы кожи во время заражения. У одного кролика на первом месяце наблюдения были положительные результаты КСР (реакция Вассермана с трепонемным антигеном - 2+, неспецифическим - 4+, кардиолипиновым - 4+). Однако повторное серологическое исследование через 7 дней и в последующие месяцы наблюдения дали отрицательные результаты.
Клинико-серологическое наблюдение за другими животными не выявило у них признаков сифилитической инфекции. Они оставались клинически здоровыми, а КСР, РИТ и РИФ-200 были отрицательными.
От 69 оставшихся в живых кроликов через 6 месяцев наблюдения произведен пассаж лимфатических узлов здоровым кроликам 1-го пассажа и затем через 6 месяцев от 62 кроликов 1-го пассажа кроликам 2-го пассажа. При наблюдении за этими кроликами также не выявлено клинических проявлений сифилиса, серологические реакции сохранились отрицательными в течение всего эксперимента. Все кролики после окончания наблюдения были реинфицированы взвесью бледных трепонем штамма Никольса, что привело к развитию твердых шанкров у всех животных, а результаты серологических реакций, исследованных через 1,5 месяца, были резко положительными.
Таким образом, в эксперименте in vitro и на кроликах in vivo показана высокая эффективность производственных факторов при обеззараживании сырья, содержащего патогенные бледные трепонемы штамма Никольса.
Литература.
1. Гаврилов O.K. Развитие трансфузиологии и основные достижения службы крови СССР.// Проблемы гематологии и трансфузиологии: Юбилейный сб. науч. работ к 50-летию ЦНИИГПК. - М., 1976. - T.1. - С. 24-42.
2. Жибург Б.Б., Сидоркевич С.В., Бондарчук Ю.В. Вирусы и сепсис: широкий спектр взаимоотношений.// Сепсис. Актуальные вопросы клиники и эксперимента; Сб. науч. тр. - Махачкала, 1997. - С. 20-23.
3. Русанов Б.М., Розенберг Г.Я. Типовой комплексный регламент производства белковых препаратов плазмы донорской крови. - М. 1979. - 303 с.
4. Профилактика трансфузионного сифилиса: заключит. отчет о НИР/ Исп. Ротанов С.В., Сергеева Э.В. М.: - ЦКВИ, 1984. - 21 с.
5. Фром А.А., Скобелев Л.И., Русанов В.М. Белки плазмы и их фракционирование в производстве препаратов крови. - М.: Медицина, 1974. - 251 с.
6. Jamieson G.A. The development of plasma perivatives for clinical use.// Proc. of the American Real Cross Symposium. - Washington, D.C., October 1971. "Vox Song".
