Амиксин: индукция интерферонов-α, -β, -γ И -λ в сыворотке крови и легочной ткани

Статьи

С. Григорян¹, доктор медицинских наук, профессор, Е. Исаева¹, кандидат биологических наук, B. Бакалов¹, Е. Осипова², кандидат медицинских наук, А. Бевз², кандидат медицинских наук, И. Простяков³, кандидат медицинских наук, C. Надоров³, кандидат биологических наук
¹Федеральный научно-исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи, Москва
²ПАО Отисифарм, Москва
³ОАО Фармстандарт, Долгопрудный E-mail: aybevz@otcpharm.ru

В строго контролируемых лабораторных условиях, соответствующих принципам доказательной медицины, идентифицированы все известные 3 типа ИФН (α/β, γ,λ), которые индуцируются препаратом Амиксин в крови и легочной ткани. Подробно изучены динамика, последовательность и профиль их системной и локальной продукции. Индукция препаратом Амиксин эндогенных ИФН 1-го, 2-го и 3-го типов в крови и легочной ткани активирует врожденный и адаптивный иммунный ответ, сохраняет иммунный гомеостаз собственного организма и предотвращает и (или) прерывает синтез вирусных нуклеиновых кислот и вирус-специфических белков, не вызывая характерных для экзогенных препаратов ИФН побочных эффектов.

Ключевые слова: индукция синтеза интерферонов, Амиксин, активация врожденного и адаптивного иммунного ответа.

Амиксин (тилорон) — низкомолекулярный синтетический индуктор синтеза интерферона (ИФН) — относится к классу флуоренонов, ИФН-индуцирующая способность которого при пероральном введении была впервые установлена в 1970 г. G. Mayer, R. Kruger [1]. Из имеющихся сегодня на фармацевтическом рынке индукторов ИФН Амиксин наиболее изучен. Более чем 30-летний опыт клинического применения свидетельствует о его безопасности и эффективности при широком круге заболеваний инфекционного и неинфекционного генеза [2]. Несмотря на разнообразие генетического материала вирусов, Амиксин, как и ИФН, подавляет фундаментальные процессы их репродукции на стадиях, обязательных для всех вирусов: блокирует адсорбцию вирусов; синтез вирусспецифических белков и сборку зрелых вирусных частиц, распознавая и дискриминируя вирусные информационные РНК от клеточных; подавляет внутриклеточное размножение вирусов. Именно поэтому к действию Амиксина чувствительны практически все РНК- или ДНК-содержащие вирусы [3, 4].

Семейство ИФН является ключевым компонентом врожденного и адаптивного иммунитета, обеспечивающим 1-ю линию защиты организма от инфекционных агентов [5]. В настоящее время идентифицированы 3 типа ИФН:

• ИФН 1-го типа, включающий в себя прежде всего ИФНα/β, который в той или иной степени продуцируется всеми ядерными клетками, оказывает прямое противовирусное действие на репликацию вирусов в инфицированных клетках, предупреждает инфицирование окружающих и, активируя каскад антивирусных сигнальных путей, включает врожденный иммунитет и способствует развитию соответствующих адаптивных иммунных ответов [6, 7];
• ИФН 2-го типа — ИФН-γ, который продуцируется разными субпопуляциями Т-лимфоцитов и естественных киллеров — NK, регулируя гомеостаз в лимфатических узлах и очагах инфекции, вызывает стимуляцию и обеспечивает функциональную эффективность специфического адаптивного иммунитета [8];
• недавно открытый 3-й тип ИФН (ИФНλ) представлен ИФН λ, - λ2, - λ3 (известными также как интерлейкин — ИЛ — 29, -28A и -28B), функционально тесно связан с ИФН 1-го типа, экспрессия рецепторов которого, однако, определяется на узком спектре клеток, ограничивая ответ на ИФН 3-го типа [9]. Мишенью ИФНλ, являются прежде всего эпителиальные клетки дыхательных путей и легких, желудочно-кишечного тракта (ЖКТ), половых органов, кожи, гепатоциты печени, мононуклеарные клетки периферической крови — peripheral mononuclear blood cells (РМВС) и плазмоцитарные дендритные клетки [10—13]. Антивирусное действие ИФН 3-го типа дополняет антивирусное действие ИФН 1-го типа; более того, оно преобладает над таковым во «входных воротах» инфекции и не вызывает характерных для ИФН 1-го типа системных побочных эффектов [14]. Все 3 типа ИФН выполняют роль 1-й линии защиты организма не только от вирусных, но и от бактериальных и паразитарных заболеваний [15, 16]. Важно отметить, что ИФН продуцируются не только при разных видах инфекционной патологии, но и под действием ряда высоко- и низкомолекулярных соединений — индукторов ИФН [3, 4].

Известно, что Амиксин стимулирует выработку в организме эндогенных ИФН, которые в ранних исследованиях тестировались биологическим методом — по противовирусному действию — и были отнесены к ИФНα, -β (1-й тип) и -γ (2-й тип) [2, 3]. Хотя 1-й мишенью контакта и воздействия Амик-сина является ЖКТ, где ведущую роль в продукции ИФН выполняют ассоциированные с тонким кишечником лимфо-идные образования (GALT — gut associated lymphoid tissue) — пейеровы бляшки, иммунокомпетентные клетки кишечника обладают уникальной способностью к миграции, и потому их стимуляция взывает активацию иммунной системы не только ЖКТ, но и легочного, урогенитального трактов и системного иммунитета [17]. Амиксин вызывает длительную циркуляцию в крови терапевтических доз ИФН, которые предотвращают инфицирование незараженных клеток и создают барьерное антивирусное состояние. Максимальная продукция ИФН в крови людей после 4-кратного еженедельного приема Амик-сина достигает в среднем 64—128 ед/мл, и она сохраняется до 8-й недели включительно [18].

Для оптимизации клинического применения индуктора ИФН — Амиксина — представлялось целесообразным: в рамках доклинического исследования, в строго контролируемых лабораторных условиях, основанных на принципах доказательной медицины, идентифицировать и провести сравнительное изучение индукции препаратом Амиксин ИФНα (1-й тип), -β (1-й тип), -γ (2-й тип) и -γ (3-й тип) в сыворотке крови и легочной ткани экспериментальных животных с использованием современных методов определения типовой принадлежности индуцируемых ИФН; определить последовательность их продукции, продолжительность аккумуляции и установить зависимость динамики индукции — продукции ИФН 1-го, 2-го и 3-го типов — в сыворотке и легочной ткани от дозы вводимого препарата. Подобные исследования препарата Амиксин ранее не проводились.

Целью настоящего исследования было идентифицировать на молекулярном уровне экспериментальные данные по индукции ИФНа и β (1-й тип), -γ (2-й тип) и -λ (3-й тип) в сыворотке крови и легочной ткани мышей препаратом Амиксин (таблетки, покрытые пленочной оболочкой, 125 мг, производитель ОАО Фармстандарт-Томскхимфарм, Россия) при его однократном пероральном (внутрижелудочном) введении в 3 дозах: 20; 40 и 400 мг/кг, рассчитанных эквивалентно разовой, максимальной суточной и десятикратной суточной дозам для человека [19], и оценить динамику продукции ИФНа, -β, -γ и -λ2/3 в сыворотке и легочной ткани мышей под действием препарата Амиксин в 3 разных дозах в течение 120 ч; продукция ИФН отслеживалась в сроки: 0; 4; 8; 12; 24; 48; 72; 96 и 120 ч.

Исследования проводились в 2 этапа:

• 1-й этап осуществлялся в Институте органического синтеза Латвии (Рига); исследовали динамику индукции и продукции ИФНа, β, -γ и -λ препаратом Амик-син в дозах 40 и 400 мг/кг в сыворотке крови мышей в течение 120 ч;
• 2-й этап осуществлялся в лаборатории индукторов интерферона Федерального научно-исследовательского центра эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи Минздрава России (Москва); исследовали динамику индукции и продукции ИФНа и -X препаратом Амиксин в дозах 20; 40 и 400 мг/кг в легочной ткани мышей в течение 120 ч.

На 1-м этапе использовались самки 55 мышей линии СВА/СаО1аНМ массой 19—30 г, полученные из вивария Harlan Laboratories (Нидерланды), на 2-м — самки 85 мышей линии СВА/CaOlaHsd массой 18—20 г, полученные из питомника Андреевка Научного центра биомедицинских технологий РАМН.

Содержание животных, их питание и уход за ними в ходе эксперимента соответствовали требованиям Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных (Приказ Минздравсоцразвития России от 23.08.10 №708н). Этические принципы обращения с лабораторными животными соблюдались в соответствии с European Convention for the Protection of Vertebral Animals Used for Experimental and Other Scientific Purposes. CETS №123. Перед исследованием животные подвергались 5-дневному карантину

Исследуемый препарат — Амиксин (тилорон), лекарственная форма: таблетки, покрытые пленочной оболочкой, 125 мг, ОАО Фармстандарт-Томскхимфарм, 634009 (Россия, Томск).

Исследуемый препарат растворяли в стерильной дистиллированной воде в концентрациях, соответствующих вводимым дозам (20; 40 и 400 мг/кг). Экспериментальные животные распределялись на 2 или 3 группы соответственно этапу исследования и дозам вводимого препарата. Подбор животных в группы осуществлялся случайным образом. Каждую дозу препарата Амиксин вводили мышам однократно перо-рально (внутрижелудочно) в объеме 50 мкл специальными дозированными зондами, размеры которых соответствовали физиологической длине пищевода животных. В каждый срок исследования использовали по 3 мыши.

Мышей выдерживали под легким эфирным наркозом до исчезновения ноцицептивных рефлексов. Забор крови производили методом декапитации в стерильных условиях. Образцы крови, полученные в каждый срок исследования, состояли из пула (смеси) крови от 3 мышей в объеме 3 мл (по 1 мл от каждой особи), из которого после центрифугирования в режиме 5000 об/мин в течение 15 мин отбирали надосадочную сыворотку в объеме 1,0 мл в стерильные пробирки типа Эппен-дорф. Сыворотки крови мышей, соответствующие каждому сроку забора, разделяли на аликвоты по 0,3 мл в 3 стерильные пробирки Эппендорф, каждую из которых хранили при температуре -70°C до проведения соответствующего иммунофер-ментного анализа (ИФА). Для получения суспензии легочной ткани обескровленных мышей фиксировали на специальных парафиновых подложках, в асептических условиях вскрывали грудную клетку, изолировали и извлекали легкие (правое и левое), которые последовательно 3-кратно промывали в буфере Hepes и в питательной среде №199, взвешивали и размельчали сначала в ступке, а затем — в специальном гомогенизаторе. Все процедуры проводились в кратчайшие сроки и на холоде. Разрушение клеток ткани легкого достигалось 3-кратным замораживанием и оттаиванием. Готовилась 10% суспензия го-могената в питательной среде №199. Супернатанты суспензии гомогената легочной ткани после низкоскоростного центрифугирования (при 1600 об/мин в течение 30 мин) отбирали и замораживали при температуре -70°С до последующего исследования методом ИФА.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИФНа, β, -γ И -λ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ И ЛЕГОЧНОЙ ТКАНИ МЫШЕЙ

Содержание ИФНа, β, -γ, и -λ2/3 в пробах сывороток и супернатантов 10% суспензии гомогенатов легочной ткани мышей определяли в сроки 0; 4; 8; 12; 24; 48; 72; 96 и 120 ч (3 мыши в каждый срок) после однократного перорально-го (внутрижелудочного) введения Амиксина в дозах 20; 40 и 400 мг/кг.

Содержание ИФНа, β, -γ и -Я2/3 (ИЛ28А/В) в сыворотке крови и надосадочной жидкости 10% суспензии легочной ткани c последующим пересчетом соответственно на 1 мл и 1 мг легочной ткани определяли методом ИФА с использованием следующих коммерческих тест-систем согласно инструкции производителя:

• Mouse Interferon Alpha ELISA Kit; R&D Systems (США);
• Mouse IFN-p ELISA Kit; PBL Interferon Source (США);
• Mouse IFN-y ELISA Kit; R&D Systems Europe LTD (Великобритания);
• DuoSet® ELISA; Mouse IL-28A/B (IFN-A.2/3) Kit; R&D Systems (CIUA).

Расчет оптической плотности исследуемых проб проводили на спектрофотометре — ридере Anthos Labtec — c использованием вошера и шейкера (Instruments GmbH, Австрия) с последующей обработкой и преобразованием данных в пикограммы в 1 мл и 1 мг (пкг/мл и пкг/мг) по компьютерной программе Software ADAP. Все исследования повторяли 2 раза.

Результаты подвергали статистической обработке путем расчета среднего арифметического (M) и стандартной ошибки (+a). Статистическую значимость различий при межгрупповых сравнениях оценивали, используя двусторонний t-критерий Стьюдента для независимых групп. Для статистических расчетов применяли компьютерную программу Microsoft Excel 2009.

ИНДУКЦИЯ ИФНа, β, -γ И -λ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ МЫШЕЙ ПРЕПАРАТОМ АМИКСИН

Однократное пероральное введение Амиксина в дозах 40 и 400 мг/кг вызывало дозозависимую индукцию и продукцию ИФНа и ИФНλ2/3 в сыворотке крови мышей; максимальное их содержание через 24 ч после введения препарата в дозе 40 мг/кг составляло соответственно 176,0±1,0 и 398±12 пкг/мл, а в дозе 400 мг/кг — соответственно 1337+93 и 2231+93 пкг/мл. Уровень продукции ИФНλ2/3 в сыворотке крови мышей под действием Амиксина в дозе 40 и 400 мг/кг в этот срок значительно (соответственно в 7,5 и 5,6 раза) был выше, чем ИФН (рис. 1).

Сопоставимыми были динамика индукции и накопления в крови ИФНβ и -γ под действием Амиксина, максимальный уровень которых достигался также через 24 ч после однократного введения препарата. Однако содержание ИФН-β и -γ в сыворотке крови экспериментальных животных на пике их продукции было ниже, чем ИФН-а и -λ2/3. При дозе Амиксина 40 мг/кг максимальный уровень синтеза ИФН-β и ИФН-γ в крови определялся на уровне фоновых терапевтических значений (соответственно 8,1+4,3 и 4,4+1,2 пкг/мл). При дозе 400 мг/кг максимальные количества ИФНр и -γ через 24 ч после введения препарата увеличивались в среднем в 10 раз в сравнении с таковыми при дозе 40 мг/кг, а в сравнении с контролем — соответственно в 110 и 46 раз (рис. 2).

По совокупности результатов, представленных на рис. 1 и 2, однократное пероральное введение Амиксина в дозах 40 и 400 мг/кг вызывало индукцию в сыворотке крови экспериментальных животных всех типов ИФН — ИФНа, β, -γ, -λ, но количество ИФНλ, и α было выше, чем ИФН-β и -γ в среднем в 10 раз.

ИНДУКЦИЯ ИФНа И -X В ЛЕГОЧНОЙ ТКАНИ МЫШЕЙ ПРЕПАРАТОМ АМИКСИН

Таким образом, по результатам 1-го этапа исследования были установлены индукция Амиксином всех 3 типов ИФН в сыворотке крови мышей и преобладание в ней продукции ИФНа и -λ2/3. На 2-м этапе была более детально изучена динамика локальной продукции ИФНа и -λ2/3 в легочной ткани мышей при введении препарата в 3 дозах: 20; 40 и 400 мг/кг.

Инициация индукции ИФНа в легочной ткани мышей выражалась в 2-кратном повышении через 24 ч после введения Амиксина в дозе 400 мг/кг среднестатистических значений его выработки относительно нулевой точки, а максимальные количества (1125 пкг/мг) синтезировались и аккумулировались только через 48 ч после индукции той же дозой препарата (рис. 3).

Низкая доза препарата через 96 ч после его введения также вызывала 2-кратное повышение содержания ИФН-а по сравнению с контролем. Увеличение дозы вводимого препарата до 40 мг/кг сопровождалось сокращением срока индукции максимальных количеств ИФНа в легочной ткани мышей к 48 ч (595,0 пкг/мг), причем в течение последующих 24 ч синтез ИФН-а сохранялся на уровне 335,0 пкг/мг

В целом под действием разных доз Амиксина в легочной ткани мышей определялась дозозависимая, но более поздняя, чем в сыворотке крови, продукция ИФН-а (см. рис. 3).

Амиксин в возрастающих от 20 до 400 мг/кг дозах вызывал также индукцию продукции в легочной ткани мышей ИФНλ, среднестатистические значения количества которого на пике продукции составляли соответственно 675,0 и 1547,5 пкг/мг.
Из данных, представленных на рис. 4, следует, что через 48 ч после введения Амиксина в низкой дозе — 20 мг/кг — в легочной ткани мышей определялось 6-кратное повышение содержания ИФНλ2/3 относительно контроля в нулевой точке.

Увеличение дозы препарата до 40 мг/кг повышало содержание в легочной ткани мышей ИФНλ2/3 до 1405,0 пкг/мг и сокращало срок индукции его максимальной продукции на 24 ч относительно низкой дозы. Иными словами, 2-кратное увеличение дозы однократно вводимого Амиксина приводило к 2-кратному повышению количества синтезированного ИФНλ2/3 и 2-кратному сокращению срока достижения пика его продукции. Максимальная доза препарата — 400 мг/кг — смещала пик индукции ИФНλ2/3 в легочной ткани мышей к 12 ч, а уровень его продукции достигал 1547,5 пкг/мг. При использовании Амиксина в дозах 20 и 40 мг/кг продолжительность синтеза ИФНλ2/3 относительно нулевой точки и его аккумуляции в легочной ткани экспериментальных животных составляла соответственно 96 ч и 72 ч. Максимальная доза препарата — 400 мг/мг — вызывала более быстрый (12 ч) и значительный подъем продукции ИФНλ2/3 (1547,5 пкг/мг), которая сохранялась на достаточном уровне (347,5 пкг/мг) относительно контроля до 24 ч включительно.

Таким образом, динамика продукции ИФНλ2/3 в легочной ткани мышей показала, что увеличение однократной пероральной дозы препарата Амиксин сокращает срок достижения пика продукции ИФНλ2/3. В дозах 20; 40 и 400 мг/ кг максимальный синтез ИФНλ2/3 в легочной ткани тестируется соответственно через 48; 24 и 12 ч после введения препарата. При этом 2-кратное повышение дозы Амиксина с 20 до 40 мг/кг вызывает более чем 2-кратное увеличение количества синтезированного в легочной ткани ИФНλ2/3 на пике его максимальной продукции соответственно с 675,00+5,94 до 1405,00+9,86 пкг/мг. При последующем 10-кратном повышении дозы препарата — с 40 до 400 мг/кг — срок достижения максимальной продукции сокращается до 12 ч, но ее уровень практически сохраняется таким, как при введении препарата в дозе 40 мг/кг через 24 ч — соответственно 1547,5+3,7 и 1405,00+9,86 пкг/мг (см. рис. 4).

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ДИНАМИКИ ПРОДУКЦИИ ИФНа И -λ В СЫВОРОТКЕ И ЛЕГОЧНОЙ ТКАНИ МЫШЕЙ ПРЕПАРАТОМ АМИКСИН

Сравнительный анализ индукции ИФН-а в сыворотке крови и легочной ткани мышей препаратом Амиксин в дозе 400 мг/кг показал, что его продукция в легочной ткани значительно (в 2,8 раза) выше, чем в сыворотке крови. Однако пик продукции ИФНа в сыворотке крови определялся через 24 ч после однократного введения препарата, максимальная же продукция ИФН-а в легочной ткани мышей тестировалась только через 48 ч. Иными словами, продукция ИФНа под действием Амиксина определялась сначала в сыворотке крови (через 24 ч после введения), а затем — в легочной ткани (через 48 ч), но в легочной ткани ИФН-а было больше (рис. 5).

Максимальный уровень продукции ИФН-λ2/3 в легочной ткани мышей под действием Амиксина в дозе 400 мг/кг достигался через 12 ч после введения препарата и составлял 1547,5+3,7 пкг/мг, а пик его продукции в сыворотке крови тестировался через 24 ч после введения препарата и составлял 2231+93 пкг/мл, что превышало содержание ИФНλ2/3 в легочной ткани на пике его продукции в 1,4 раза. Иными словами, максимальный синтез ИФН-λ2/3 в легочной ткани достигался быстрее, чем в сыворотке крови мышей, но его количество было меньше (рис. 6).

Таким образом, индукция и продукция ИФНа в сыворотке крови опережает таковую в легочной ткани на 24 ч, но на пике продукции количество ИФН-а в сыворотке крови значительно уступает таковому в легочной ткани (в 2,8 раза), а индукция и продукция ИФНλ2/3 в легочной ткани опережает таковую в сыворотке крови мышей на 12 ч, но на пике продукции количественно тестируется на более низком уровне, чем в сыворотке крови мышей (в 1,4 раза; см. рис. 6).

Сравнительный анализ результатов индукции ИФНа и -λ2/3 в сыворотке крови мышей под действием однократной дозы Амиксина 400 мг/кг показал, что срок достижения их максимальной продукции совпадает — через 24 ч после введения препарата. Однако количество в крови ИФНλ2/3 на пике его продукции в 5,6 раза выше, чем ИФНа (соответственно 2231+93 и 398+12 пкг/мл; рис. 7).

В легочной ткани мышей максимальный синтез ИФНλ2/3 под действием Амиксина в той же дозе опережает синтез ИФНа на 36 ч и превосходит его количественно в 1,4 раза (соответственно 1547+3 и 1125,00+14,43 пкг/мг; рис. 8).

Итак, исходя из суммарных данных исследования и их сравнительного анализа, препарат Амиксин в дозе 40 мг/кг (эквивалентной суточной дозе для человека) вызывает пролонгированную системную индукцию и продукцию ИФНа, -β, -γ и- λ в сыворотке крови, максимальный уровень которых определяется уже через 24 ч после введения препарата, а фоновые значения сохраняются до 120 ч (5 сут) включительно. Одновременно Амиксин в дозе 40 мг/кг индуцирует пролонгированную локальную продукцию ИФНλ, и α в легочной ткани экспериментальных животных, максимальный уровень которой тестируется соответственно через 24 и 48 ч после введения препарата и также сохраняется на терапевтических значениях до 96 и 120 ч включительно.

Динамика аккумуляции ИФНа, β, -γ и - λ в крови при использовании препарата Амиксин в дозе 400 мг/кг (эквивалентной курсовой для людей) аналогична таковой при дозе 40 мг/кг, но количества ИФНа и -Я, синтезированных на пике продукции, увеличиваются в среднем в 2 раза, а ИФНр и -γ — в 10 раз и сохраняются на уровне терапевтических значений в течение 120 ч. Максимальная локальная продукция ИФНа в легочной ткани мышей под действием Амиксина в дозе 400 мг/кг определяется через 48 ч, а синтез максимальных количеств ИФНλ2/3 увеличивается и ускоряется на 36 ч, опережая максимальную продукцию ИФНа в легочной ткани при дозе препарата 400 мг/кг. В последующие сроки исследования до 120 ч включительно в легочной ткани экспериментальных животных определяется локальная продукция терапевтического количества как ИФНа, так и ИФНλ.

Таким образом, однократный прием препарата Амиксин в дозе, эквивалентной суточной дозе для человека, в течение первых 24 ч индуцирует ИФН 1-го, 2-го и 3-го типов в крови и легочной ткани мышей. Повторные приемы Амиксина в указанной дозе (суммарно соответствующей курсовой дозе для человека) с интервалом в 48 ч позволяют избежать характерного для индукторов ИФН феномена гипореактивности и обеспечивают постоянную максимальную выработку всех типов ИФН в крови и дополнительно локальную — в легочной ткани. Следует отметить также, что, хотя по результатам исследований максимальная продукция ИФНа и -Я2/3 в сыворотке крови мышей под действием Aмиксинa в дозах 40 и 400 мг/кг тестируется одновременно — через 24 ч, количество ИФНλ2/3 выше, чем ИФНа, соответственно в 7,6 и 5,6 раза. В легочной ткани мышей также всегда тестируется большее содержание ИФНλ2/3, сроки достижения которого опережают таковые для ИФНа соответственно на 24 и 36 ч. Такая последовательность системной и локальной продукции ИФНа и - λ в сыворотке крови и легочной ткани указывает на взаимно индуцирующий характер их взаимодействия, когда предварительно синтезированный в большем количестве ИФНλ2/3 способствует и (или) стимулирует индукцию и продукцию ИФНа и наоборот. Известно, что ИФНа и - λ имеют общий механизм регуляции продукции и обладают взаимно индуцирующим действием [20—22]. Многочисленными исследованиями последних лет установлено также, что разные штаммы вируса гриппа А, в том числе высокопатогенный штамм H1N1 (2009), обладают повышенной чувствительностью к ИФН-α и - λ [11, 15, 23, 29], преобладающая продукция которых определяется и в проведенных нами исследованиях. Индуцированные препаратом Амиксин плюрипотентные молекулы ИФН 1-го, 2-го и 3-го типов могут оказывать как системное действие на организм в целом, так и, что особенно важно, адресное противовирусное действие на орган-мишень не только при гриппе, но и при других острых респираторных вирусных инфекциях (ОРВИ) и выполняют ключевую роль в повышении барьерной защитной функции легочной ткани [12, 24—28, 30]. Согласно последним научным публикациям, при инфицировании вирусом гриппа А количество вирусиндуцированного ИФНА, в легочной ткани мышей также больше, чем ИФНа [11, 12, 23], что указывает на его доминантную, защитную роль в очагах поражения гриппозной инфекцией.

Корреляция результатов действия разных доз препарата Амиксин в условиях отсутствия инфицирования с аналогичными данными под действием вируса гриппа А связана, вероятно, со сходством механизмов продукции ИФНа и -Я, индуцированных вирусом и препаратом Амиксин, что научно обосновывает профилактический и лечебный эффекты препарата, направленные на повышение противовирусной защиты «входных ворот» инфекции, органов-мишеней и организма в целом как при гриппозной, так и при других ОРВИ. Не исключено также, что подобный механизм преобладания индукции Амиксином локальной продукции ИФНа и -Я, особенно ИФНλ, во «входных воротах» инфекции и органах-мишенях может быть актуален при вирусных инфекциях кишечного и урогенитального трактов. Ведущая защитная роль локальной продукции ИФНλ описана, в частности, при ротавирусной и генитальной герпетической инфекциях [10, 11, 14]. Ранее при изучении кинетики синтеза под действием Амиксина ИФН в органах и тканях также установлена опережающая во времени и количественно его продукция в такой последовательности: кишечник—печень—легкие—кровь [3, 17].

В настоящей работе впервые в строго контролируемых лабораторных условиях, соответствующих принципам доказательной медицины, идентифицированы все 3 известных типа ИФН, которые индуцируются препаратом Амиксин в крови и легочной ткани; подробно изучены динамика, последовательность и профиль их системной и локальной продукции. Согласно результатам исследования, препарат Амиксин является быстродействующим (в первые 24 ч) противовирусным средством эндогенной пролонгированной стимуляции выработки ИФН 1—3-го типов в крови и ИФН 1-го и 3-го типов — в легочной ткани. В совокупности они активируют собственные защитные силы легких и организма в целом, что свидетельствует о возможности профилактического применения препарата для предотвращения повторных ОРВИ. Преобладание аккумуляции ИФНа и - λ в крови и, что особенно важно, — ИФНА, в легких, указывающее на его доминирующую роль в защите легочной ткани — «входных ворот» респираторной инфекции разного генеза — свидетельствует о том, что препарат Амиксин может и должен использоваться с лечебной целью как на ранних, так и на поздних стадиях развития ОРВИ для противовирусной защиты 1-й линии от воздействия возбудителя на орган-мишень. Многократное профилактическое или лечебное применение препарата Амиксин с минимальным интервалом в 48 ч позволит ускорить и увеличить продукцию ИФН и избежать развития феномена гипореактивности.

Таким образом, сегодня препарат Амиксин является единственным из зарегистрированных в РФ индукторов ИФН, действие которого на выработку всех 3 типов ИФН в крови и 1-го и 3-го типов — в легочной ткани достоверно доказано.

Индукция препаратом Амиксин эндогенных ИФН 1—3-го типов в крови и легочной ткани активирует врожденный и адаптивный иммунный ответ, сохраняет иммунный гомеостаз организма и предотвращает и (или) прерывает синтез вирусных нуклеиновых кислот и вирусспецифических белков, не вызывая характерных для экзогенных препаратов ИФН побочных эффектов.

Литература

1. Mayer G., Kruger R. Tilorone hydrochloride: mode de action // Science. -1970; 169: 1214-5.
2. Чижов Н.П. Смольская Т.Т., Байченко П.И. и др. Клинические исследования переносимости и интерферон индуцирующей активности амиксина // Вопр. вирусологии. - 1990; 5: 411—1.
3. Тазулахова Э.Б. Закономерности индукции и продукции а-, у- интерферона. Автореф. дис. ... д-ра биол. наук. М., 1986.
4. Интерферон-2011. Сб. научных статей / М., 2012.
5. Shapira S., Hacohen N. Systems biology approaches to dissect mammalian innate immunity // Curr. Opin. Immunol. - 2011; 23: 2373-7.
6. Hertzog P. Type 1 interferons as primers, activators and inhibitors of innate and adaptive immune responses // Immunol. Cell. Biol. - 2012; 90: 471-3.
7. Hervas-Stubs S., Perez-Garcia J. et al. Direct effects of type 1 interferons on cеlls of immune system // Clin. Cancer Res. - 2011; 17: 2619-27.
8. Choubey D., Moudgi K. Interferons in autoimmune and inflammatory diseases: regulation and roles // J. Interferon & Cytokine Res. - 2011; 12: 857-65.
9. Hillyer Ph., Mane V. et al. Expression profiles of human interferon-alpha and interferon-lambda subtypes are ligand- and cell-dependent // Immunol. Cell Biol. - 2012; 90: 774-83.
10. Mordstein M., Neugebauer E. et al. Lambda Interferon reders epithelial cells of respiratory and gastrointestinal tracts resistant to viral infections // J. Virol. -2010; 11: 5670-77.
11. Durbin R., Kotenko S., Durbin J. Interferon induction and function at the mucosal surface // Immunol. Rev. - 2013; 255: 25-39.
12. Jewell N., Cline T. et al. Lambda Interferon is the predominant interferon induced by Influenza A virus infection in vivo // J. Virol. - 2010; 84: 11515-22.
13. Donnelly R., Kotenko S. Interferon-Lambda: A new addition to an old Family // J. Interferon & Cytokine Res. - 2010; 8: 555-64.
14. Kotenko S. IFN-Xs // Curr. Opin. Immunol. - 2011; 23: 1-8.
15. Levy D., Marie I. Induction of type 1 and 3 interferon in response to viral infection // Curr. Opin. Virol. - 2011; 1: 476-86.
16. Wang B., Fish E. The yen and yang of viruses and interferons // Trend Immunol. - 2012; 33: 190-7.
17. Григорян С.С., Ершов Ф.И., Поверенный А.М. и др. Особенности продукции интерферона при энтеральном введении индукторов интерферона // Вопр. вирусол. - 1988; 1: 67-70.
18. Григорян С.С., Иванова А.М., Ершов Ф.И. Противовирусная активность амиксина и его влияние на интерфероновый статус // Вопр. вирусол. - 1990; 2: 138-Ю.
19. Миронов А.Н., Бунатян Н.Д. и др. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств / М.: Гриф и К, 2012.
20. Iversen M., Paludan S. Mechanisms of type 3 interferon expression // J. Interferon & Cytokine Res. - 2010; 8: 573-8.
21. Onoguchi K., Yoneyama M. et al. Viral infection activate type 1 and 3 interferon gene through a common mechanism // J. Biol. Chem. - 2007; 282: 7576-81.
22. Ank N., West H. et al. X Interferon (IFN-A), a type 3 IFN, is induced by viruses and IFNs and displays potent antiviral activity against select virus infections in vivo // J. Virol. - 2006; 80: 4501-9.
23. Hermant P., Michiels Th. Interferon-X in the context of viral infections; production, response and therapeutic implication // J. Innate Immune. - 2014; 6: 563-74.
24. Okabayashi T., Kojima T. Masaki T. et al. Type 3 interferon, not type 1, is predominant interferon induced by respiratory viruses in nasal epithelial cells // Virus Res. - 2011; 1-2: 360-6.
25. Mordsstein M., Neugebauer E., Ditt V. et al. Lambda interferon renders epithelial cells of respiratory and gastrointestinal tracts resistant to viral infections // J. Virol. - 2010; 84 (11): 5670-7.
26. Svetlikova D., Kabat P. et al. Influenza A virus replication is inhibited in IFN -Л2 and IFN-A3 transfected or stimulated cells // Antiviral. Res. - 2010; 88 (3): 329-3.
27. Khaitov M., Laza-Stanca V., Edwards M. et al. Respiratory virus induction of alpha-beta- and lambda interferons in bronchial epithelial cells and peripheral blood mononuclear cells // Allergy. - 2009; 63 (3): 375-86.
28. Wang J., Oberley-Deegan R., Wang Sh. et al. Differentiated human alveolar type 2 cells secrete antiviral IL-29 (IFN-A1) in response to influenza A infection // J. Immunol. - 2012; 182: 1296-304.
29. Osterlund P., Pirhonen J., Ikonen N. et al. Pandemic H1N1 Influenza A virus highly sensitive to the antiviral action of interferons // J. Virol. - 2010; 84: 1414-22.
30. Ank N., Iversen M. et al. An important role for type 3 interferon in TLR-induced antiviral activity // J. Immunol. - 2008; 180: 2474-85.

Комментарии