Экспериментальное изучение влияния препарата Септолете плюс на факторы противовирусного иммунитета in vitro

Статьи

О.Ф. Мельников, М.Д. Тимченко, Л.Д. Кривохатская, Э.А. Мурзина
ГУ «Институт отоларингологии им. проф. А.И. Коломийченко АМН Украины»
Резюме. В условиях эксперимента in vitro изучено влияние препарата Септолете плюс на выработку α- и γ-интерферонов клетками небных миндалин и мононуклеаров периферической крови больных хроническим тонзиллитом в присутствии индуктора интерферона и без него, а также на цитолитическую активность в отношении ксеногенных эритроцитов. Установлено, что препарат Септолете плюс активировал продукцию раннего интерферона и выступал в роли кофактора при использовании индуктора интерфероногенеза — ридостина. Препарат умеренно стимулировал цитолитическую активность естественных цитотоксических клеток миндалин и периферической крови.
Ключевые слова: Септолете плюс, интерферон, противовирусный иммунитет.

Введение

Сегодня в связи с повышением уровня заболеваний, обусловленных вирусами, и особенно гриппа, наблюдается увеличение числа исследований, направленных на изучение антивирусных свойств у фармацевтических препаратов, которые используются как противовоспалительные средства [2, 6]. Одним из эффективных препаратов с антисептическим характером действия, который широко используется в отоларингологии, является препарат местного применения — Септолете плюс, состоящий из цетилпиридиния хлорид (антисептический компонент) и анестетика (бензокаин). Ранее было показано, что Септолете плюс не обладает депрессорным действием на состояние местного иммунитета, основанного на определении иммуноглобулинов, лактоферрина и цитокинов в ротоглоточном секрете больных острым фарингитом [8]. Известно, что одним из основных антивирусных механизмов является продукция ранних интерферонов — α- и β- и более позднего γ-интерферона [5]. Эти интерфероны на первых этапах вирусного заражения могут блокировать вирусную информационную РНК в инфицированной клетке и препятствовать репродукции вирусов. Далее интерфероны способны активировать естественные цитотоксические клетки (ЕЦК) и цитотоксические Т-лимфоциты [4]. По мнению авторов, механизм антивирусной защиты состоит, по крайней мере, из таких последовательных механизмов:

  • внутриклеточная ингибиция ранними интерферонами репродукции вирусов;
  • удаление с помощью ЕЦК и Т-лимфоцитов инфицированных клеток;
  • приобретение здоровыми клетками, которые находятся возле очага заражения, резистентности к инфицированию за счет ранних интерферонов;
  • привлечение в очаг заражения макрофагов и лейкоцитов и активация их функциональной активности.

Цель работы — исследовать in vitro антивирусные свойства препарата Септолете плюс, его способность усиливать продукцию интерферонов и деструктивные свойства тканевых и кровяных естественных цитотоксических клеток.

Материал и методы исследования

Исследования in vitro проведены на клетках небных миндалин и периферической крови 12 больных хроническим тонзиллитом в возрасте 7–19 лет. Этим больным по показаниям проведена тонзилэктомия. Клеточный материал получен из ткани миндалин и крови в соответствии с рекомендациями О.Ф. Мельникова и И.П. Кайдашева [7, 10]. Культивирование клеток проводили в питательной среде RPMI-1640 с добавками (L-глютамин, эмбриональная телячья сыворотка 5%, гентамицин 40 мкг/мл) в течение 18 часов для определения уровня цитолиза и в течение 24 часов — для определения интерферонопродукции с различными концентрациями препарата: «1» и «2». Контролем служили образцы культивируемых клеток крови и миндалин без препарата, где определяли исходный уровень активности и через 24 часа культивирования. Разведение препарата Септолете плюс «1» соответствовало добавлению к клеткам 0,1 мл водно-солевого экстракта, содержащего 1 измельченную таблетку препарата в 5 мл раствора Хэнкса и стерилизованного пропусканием через фильтр типа Millipore. Разведение «2» соответствовало 0,01 мл исходной концентрации. После 18-часового культивирования в опытных и контрольных образцах определяли цитолитическую активность клеток в отношении эритроцитов цыплят по спектрофотометрическому методу (анализатор Stat-fax 2100, США), описанному О.Ф. Мельниковым и Т.А. Заяц [11]. В надосадочной жидкости после суточного культивирования клеток определяли содержание α- и γ-интерферонов иммуноферментным методом с помощью набора реактивов ООО «Протеиновый контур» (Спб, РФ) и иммуноферментного анализатора Stat-Fax-2100 (США). Кроме того, для проверки предположения о возможной потенцирующей интерферонообразование способности препарата в отдельные пробы с указанными концентрациями препарата добавляли индуктор интерфероногенеза – ридостин по 0,1 мл. Все пробы выполнялись в дублирующем исполнении. Материалы статистически обработаны с применением метода углового преобразования (?) по Фишеру [1].

Результаты исследований и их обсуждение

В ходе исследования установлено, что препарат Септолете плюс достоверно усиливал образование ранних (α) интерферонов в культуре как клеток миндалин, так и клеток крови и обладал потенцирующим действием при добавлении ридостина (табл. 1). На продукцию позднего, иммунного интерферона (γ) как клетками небных миндалин, так и клетками крови препарат влияния не оказывал (рис. 1).

Это обстоятельство определяет исключительную целесообразность применения Септолете плюс на ранних этапах инфекционного вирусного процесса, т.к. в процессе его рассасывания в ротовой полости препарат контактирует с поверхностью небных миндалин или диффузными лимфоидными фолликулами и может активировать в них продукцию α-интерферона.

Что касается влияния препарата на цитолитическую активность клеток крови и небных миндалин, то достоверного усиления этой активности выявлено не было (табл. 2). Хотя вектор отклонений при добавлении различных концентраций препарата был одинаковым в сторону усиления деструктивной способности клеток (30–89% от исходной величины) при использовании Септолете плюс в 9 из 12 наблюдений.

Таблица 1
Продукция α-интерферона клетками небных миндалин и крови in vitro под действием Септолете плюс

ГруппаКонцентрация α-интерферона, пг/мл
клетки небных
миндалин, М±m
клетки
периферической
крови, M±m
Исходный уровень8,4±0,98,2±1,5
Септолете плюс15,3±1,8* (<0,01)17,0±2,9* (<0,05)
Септолете плюс + ридостин22,1±3,3 (<0,07)25,0±4,3* (>0,05)
Примечание. * — в сравнении с препаратом.

Таблица 2
Цитолитическая активность клеток небных миндалин и крови больных хроническим тонзиллитом при культивировании с различными концентрациями препарата Септолете плюс

ГруппаАктивность деструкции мишеней -
% эритроцитолиза
клетки небных
миндалин, М±m
клетки
периферической
крови, M±m
Исходная взвесь клеток20,1±6,028,6±10,1
+ Септолете «1»24,7±4,534,6±10,3
+ Септолете «2»26,0±7,336,0±11,3


Рис. Влияние препарата Септолете плюс в различных концентрациях на продукцию γ-интерферона клетками небных миндалин и периферической крови in vitro

Известно, что активация функции ЕЦК связана с влиянием системы интерферона и других цитокинов [13] и до известной степени определяет противовирусный потенциал препарата [3, 4, 9]. Исходя из того, что препарат способен активировать синтез ранних интерферонов, играющих важную роль на начальных этапах инфекционного процесса [12], можно считать целесообразным применение препарата Септолете плюс в начальных стадиях вирусной инфекции.

Выводы

  1. Раствор препарата Септолете плюс в условиях культивирования с клетками небных миндалин или периферической крови активирует синтез α-интерферона.
  2. Препарат Септолете плюс способен усиливать действие индуктора α-интерферона — ридостина в условиях in vitro.
  3. Не выявлено существенных изменений в продукции позднего интерферона (γ) в культуре клеток крови и миндалин под действием препарата Септоле-те плюс.
  4. Препарат Септолете плюс не угнетал активности естественных цитотоксических клеток крови и миндалин in vitro и имел вектор изменений в сторону стимуляции деструктивной активности мононуклеаров.
  5. Препарат Септолете плюс может применяться при массовых вирусных заболеваниях верхних дыхательных путей.

Литература

  1. Гублер Е. В. Математические методы анализа и распознавания патологических процессов / Е. В. Гублер. - Л. : Медицина, 1978. - 294 с.
  2. Действие препарата Инфлюцид in vitro против пандемического штамма 2009 г А (Н1N1) «Свиного» («мексиканского») гриппа / М. Ю. Еропкин, Н. И. Коновалов, В. А. Григорьева [и др.] // Традиционная медицина. - 2009. -№3(18). - С. 8-12.
  3. Дранник Г. Н. Клиническая иммунология и аллергология / Г. Н. Дранник. -К. : Полиграф-Плюс, 2006. - 481 с.
  4. Ершов Ф. И. Ранние цитокиновые реакции при вирусных инфекциях / Ф. И. Ершов, А. Н. Норовлянский, М. В. Мезенцева // Цитокины и воспаление. - 2004. - Т. 3, №1. - С. 3-6.
  5. Ершов Ф. И. Система интерферонов в норме и патологии / Ф. И. Ершов. -М. : Медицина,1996. - 240 с.
  6. Исследование противовоспалительных свойств тонзилотрена в эксперименте / О. Ф. Мельников, С. В. Тимченко, И. В. Фараон, А. Ю. Бредун // Журн. вушн., нос. і горлових хвороб. - 2008. - №6. - С. 37-40.
  7. Кайдашев І. П. Методи клінічних та експериментальних досліджень у медицин / І. П. Кайдашев. - Полтава : Полимет, 2003. - 319с.
  8. Клинико-иммунологическая характеристика больных хроническим фарингитом в стадии обострения при лечении препаратом Септолете плюс / Д. И. Заболотный, В. Д. Пшеничкина, О. Г. Вольская, О. Ф. Мельников // Журн. вушн., нос. і горлових хвороб. — 2007. — №6. — С. 2—8.
  9. Кривицкая В. З. Иммунопатологический аллергический Th-2 тип противовирусного гуморального иммунитета у детей с респираторно-синцитиальной вирусной инфекцией / В. З. Кривицкая, А. А. Сомнина, В. Ф. Сухолвецкая // Цитокины и воспаление. — 2004. — Т. 3, №3. — С. 34—37.
  10. Мельников О. Ф. Иммунологические аспекты генеза хронического тонзиллита и регуляции функциональной активности небных миндалин : дис. … д-ра мед. наук : 14.00.16 / О. Ф. Мельников ; Институт физиологии АН УССР. — К., 1981. — 294 с.
  11. Мельников О. Ф. Сравнительная оценка радиоизотопного и спектрофото-метрического методов регистрации цитолиза / О. Ф. Мельников, Т. А. Заяц // Лаб. диагностика. — 1999. — №2. — С. 32—34.
  12. Никулин Б. А. Оценка и коррекция иммунного статуса / Б. А. Никулин. — М. : ГЭОТА, 2008. — 375 с.
  13. Симбирцев А. С. Цитокины : классификация и биологические функции / А. С. Симбирцев // Цитокины и воспаление. — 2004. — Т. 3, №2. — С. 16—22.
1 марта 2011 г.

МЕДИ РУ в: МЕДИ РУ на YouTube МЕДИ РУ в Twitter МЕДИ РУ на FaceBook МЕДИ РУ вКонтакте Рейтинг@Mail.ru Яндекс.Метрика