Аминокислотный состав белков женского молока при позднем гестозе на фоне железодефицитной анемии
СтатьиОпубликовано в журнале:
Южно-Российский медицинский журнал »» № 4-5 '99
Акушерство и гинекология Н.С-М. Омаров, Р.А. Абдуллаев
Проблемная лаборатория репродуктивного здоровья ДНЦ РАМН
Гестоз и анемия - наиболее частые патологические состояния, осложняющие течение беременности у женщин. Частота гестоза остается высокой (12-27%) и имеет тенденцию не к снижению, а к повышению [4, 5, 6]. Анемия при беременности наблюдается у 30-60% женщин, и с ухудшением социально-экономического положения населения показатель ее возрастает [2, 4].
Сочетание гестоза с анемией имеет место в 15-30% случаев и приводит к значительному ухудшению исхода как для матери, так и для плода [3].
Проблемы гестоза и анемии у беременных всесторонне изучались и изучаются как у нас в стране, так и за рубежом. Вместе с тем, вне поля зрения исследователей остается вопрос влияния гестоза в сочетании с анемией на лактационную функцию женщин.
Задачей настоящего исследования являлось определение влияния гестоза на фоне анемии на аминокислотный состав белков женского молока.
Грудное молоко является уникальным продуктом, содержащим почти полный набор природных веществ, необходимых для питания ребенка. Важное место в составе молока занимают белки, как источник заменимых и незаменимых аминокислот. В функциональной деятельности организма аминокислоты выполняют субстратную, регуляторную функции в биосинтезе белка, активно включаются в энергетику, являются источниками физиологически активных аминов, принимают участие в образовании нуклеиновых кислот, липидов, гормонов.
В связи с вышеизложенным, мы исследовали содержание казеина и сывороточных белков в зрелом молоке и их аминокислотный состав у здоровых родильниц и кормящих женщин с гестозом в сочетании с анемией.
Материал и методы
Зрелое молоко, взятое на 6 день пуэрперия, исследовали у 40 здоровых родильниц и у 40 с поздним гестозом в сочетании с анемией. Исследования проводились у женщин со 2-й, 3-й степенью тяжести нефропатии и 2-й, 3-й степенью тяжести железодефицитной анемии, родоразрешенных через естественные родовые пути. Степень тяжести гестоза определяли по шкале Виттлингера, а анемии - по рекомендации ВОЗ (1970).
Количественное содержание казеина и белков сыворотки молока определяли методом V.N. Lowry et аl. [7]. Содержание белка выражали в мг на 1 мл молока. Для получения казеиновой фракции белка молоко после обезжиривания подкисляли 1% раствором уксусной кислоты до рН=4,7. Из надосадочной жидкости сывороточные белки осаждали 6% раствором трихлоруксусной кислоты.
Для определения аминокислотного состава по 5 мг белка каждой фракции гидролизовали в 3 мл 6Н соляной кислоты в запаянных ампулах при температуре 110°С (по методу Л.П. Алексеенко) [1], в фарфоровую чашечку переносили 0,5 мл гидролизата и упаривали на водяной бане при температуре 50-60°С. Осадок растворяли в 2 мл натрий-цитратного буфера рН 2,2 и переносили в пробирку. Из полученного раствора гидролизата на ионообменную хроматографическую колонку анализатора аминокислот ААА-801 наносили 200 мкл. Разделение аминокислот проводили в первом эксплуатационном режиме по модифицированному методу жидкостной ионообменной хроматографии [D.H. Spackman et аl., 7]. Содержание аминокислот в белках молока выражали в мкмолях на 1 мг сухого белка.
Результаты и обсуждение
По нашим данным в молоке здоровых женщин содержится 14,43+/-0,11 мг общего белка на 1 мл молока (табл. 1). Женское молоко отличается высоким содержанием сывороточных белков (9,09+/-0,08 мг/мл) и сравнительно низким содержанием казеина (5,34+/-0,04 мг/мл). У женщин с гестозом и анемией содержание общего белка снижается на 15,8%. При этом концентрация казеина уменьшается на 19,4%, а белков сыворотки на - 13,5%.
Таблица 1 Содержание белка в молоке здоровых и больных родильниц (мг/мл, n=40)
| Ингредиенты женского молока | Здоровые родильницы | Больные родильницы | Достоверность |
| Общий белок | 14,43+/-0,11 | 12,15+/-0,10 | p<0,05 |
| Сывороточные белки | 9,09+/-0,08 | 7,86+/-0,07 | p<0,05 |
| Казеин | 5,34+/-0,04 | 4,29+/-0,03 | p<0,05 |
Снижение содержания белков в молоке женщин в условиях патологии обусловлено, видимо, изменением интенсивности их протеолиза и синтеза.
Изменение соотношения скоростей синтеза и распада отдельных групп белков отражается, несомненно, на аминокислотном составе фракций белков молока (табл. 2). Как видно из таблицы, характерной особенностью сывороточных белков и казеина молока здоровых женщин является высокое содержание дикарбоновых аминокислот. Содержание гистидина, пролина, тирозина в белках молока невелико и составляет около 0,17-0,29 мкмоль на 1 г белка. По суммарному содержанию аминокислот казеин и сывороточные белки существенно не отличаются друг от друга. При этом необходимо отметить, что соотношение суммы незаменимых аминокислот к сумме заменимых аминокислот в казеине превышает таковое в сывороточных белках на 8,6%.
Таблица 2 Аминокислотный состав белков молока у здоровых и больных родильниц (мкМ/мг белка, n=40)
| Аминокислоты | Здоровые женщины (М+/-m) | Больные женщины (М+/-m) | ||
| Белки сыворотки | Казеин | Белки сыворотки | Казеин | |
| Лизин | 0,37+/-0,02 | 0,48+/-0,03* | 0,35+/-0,02 | 0,41+/-0,02 |
| Гистидин | 0,25+/-0,02 | 0,29+/-0,02 | 0,27+/-0,02 | 0,22+/-0,01** |
| Аргинин | 0,39+/-0,02 | 0,25+/-0,02 | 0,39+/-0,02 | 0,25+/-0,01 |
| Аспартат | 1,06+/-0,08 | 1,16+/-0,08 | 1,10+/-0,08 | 1,36+/-0,09** |
| Треонин | 0,48+/-0,02 | 0,36+/-0,02 | 0,48+/-0,03 | 0,36+/-0,02 |
| Серии | 0,47+/-0,03 | 0,58+/-0,02 | 0,43+/-0,45* | 0,45+/-0,03 |
| Глутамат | 1,31+/-0,09 | 1,47+/-0,09 | 1,31+/-0,11 | 1,83+/-0,11** |
| Пролин | 0,18+/-0,01 | 1,47+/-0,09 | 0,23+/-0,01* | 0,23+/-0,02 |
| Глицин | 0,45+/-0,03 | 0,25+/-0,01* | 0,41+/-0,03 | 0,32+/-0,02** |
| Аланин | 0,50+/-0,03 | 0,43+/-0,02 | 0,55+/-0,03 | 0,45+/-0,03 |
| Валин | 0,34+/-0,02 | 0,59+/-0,03* | 0,30+/-0,02 | 0,49+/-0,03 |
| Изолейцин | 0,39+/-0,03 | 0,27+/-0,02 | 0,35+/-0,02 | 0,22+/-0,01** |
| Лейцин | 0,69+/-0,04 | 0,97+/-0,05* | 0,72+/-0,04 | 0,75+/-0,05* |
| Тирозин | 0,38+/-0,02 | 0,17+/-0,01* | 0,40+/-0,02 | 0,16+/-0,01 |
| Метионин | 0,15+/-0,01 | 0,34+/-0,02* | 0,13+/-0,01 | 0,15+/-0,01** |
| Фенилаланин | 0,19+/-0,01 | 0,25+/-0,01 | 0,22+/-0,02 | 0,35+/-0,02 |
| Сумма | 7,60+/-0,31 | 8,09+/-0,43 | 7,70+/-0,46 | 8,00+/-0,53 |
| Заменимые | 4,45+/-0,10 | 4,29+/-0,18 | 4,49+/-0,23 | 4,80+/-0,25** |
| Незаменимые | 3,15+/-0,15 | 3,80+/-0,16 | 3,21+/-0,17* | 3,20+/-0,16** |
| Соотношение заменим./незаменим. | 0,74 | 0,87 | 0,71 | 0,65 |
| Дикарбоновые | 2,37+/-0,12 | 2,63+/-0,13 | 2,47+/-0,14 | 3,19+/-0,17** |
| Диаминовые | 1,01+/-0,08 | 1,02+/-0,07 | 1,01+/-0,09 | 0,88+/-0,04** |
| Соотношение дикарбон./диаминов. | 1,95 | 2,58 | 2,04 | 3,62* |
| Гидрофобные | 2,54+/-0,12 | 3,08+/-0,13* | 2,47+/-0,15 | 2,64+/-0,14** |
| Гидрофильные | 4,23+/-0,19 | 4,59+/-0,16 | 4,39+/-0,24 | 4,48+/-0,28 |
| Соотношение гидрофоб./гидрофиль. | 0,52 | 0,70 | 0,52 | 0,55 |
Питательная ценность казеина определяется высоким содержанием таких незаменимых аминокислот, как лейцин, валин, лизин.метионин. Кроме того, казеин, по сравнению с белками сыворотки молока, имеет более кислый характер. Так, соотношение суммы дикарбоновых аминокислот к сумме диаминовых в казеиновой фракции составляет 2,58, а во фракции сывороточных белков - 1,95. Степень гидрофобности казеина молока (соотношение гидрофобных аминокислот к гидрофильным) у здоровых женщин составляет 0,7, что существенно выше, чем у сывороточных белков (табл. 2).
Как видно из этой таблицы, у женщин с гестозом и анемией достоверно увеличивается суммарное содержание заменимых аминокислот за счет глютаминовой кислоты, аспарагиновой кислоты, глицина и снижается суммарное содержание незаменимых аминокислот за счет лейцина, изолейцина, метионина, валина, гистидина.
Анализ полученных результатов по соотношению суммы гидрофобных аминокислот (аланина, пролина, фенилаланина, валина, лейцина, изолейцина) к сумме гидрофильных аминокислот (глютамата, аспарагата, серина, треонина, аргинина, лизина, гистидина) показывает снижение степени гидрофобности казеиновой фракции белков молока родильниц с гестозом и анемией. Вместе с тем, у этих женщин в аминокислотном составе сывороточных белков молока, по сравнению с таковыми у здоровых женщин, существенные различия не наблюдаются.
Таким образом, в зрелом молоке женщин с гестозом и анемией имеет место значительное снижение содержания общего белка, в большей степени за счет казеиновой фракции. Изменяется у больных женщин аминокислотный состав казеиновой фракции белков за счет увеличения суммарного содержания заменимых аминокислот и снижения суммарного содержания незаменимых аминокислот. Аминокислотный состав сывороточных белков молока у женщин с гестозом и анемией по сравнению с молоком здоровых женщин достоверно не изменяется.
Литература
1. Алексеенко Л.П. Аминокислотный анализ белков, тканевых экстрактов и биологических жидкостей. В кн. Современные методы в биохимии // М.,Медицина. -1964. -Т.1. -С. 129-161.
2. Ваганов Н.Н., Гаврилова Л.В., Толкунов Ф.С. О ходе реализации программы "Планирование семьи" в Российской Федерации. // Вестник акушер. гинекол. -1995. -N4. -С.3-8.
3. Джаманаева К.Б., Абдыкадыкова Б. Частота ОПГ-гестозов при анемии в Казахстане. // "Проблемы ОПГ-гестозов". Тезисы докладов. Чебоксары, 1996. -с.9.
4. Кулаков В.И., Бурлев В.А., Коноводова Е.Н., Мурашко Л.Е. др. Клиническое значение сывороточного железа и ферритина у беременных с железодефицитной анемией и гестозом. // Материалы международного симпозиума "Актуальные вопросы профилактики и лечения гестоза".М. -1998. -С.66-67.
5. Савельева Г.М. Современные принципы диагностики, лечения и профилактики ОПГ-гестозов. // "Проблемы ОПГ-гестозов". Тезисы докладов. Чебоксары, 1996. -с.80.
6. Савельева Г.М., Шалина Р.И., Панина О.Б., Курцер М.А. Гестозы (патогенез, диагностика, клиника).// Материалы международного симпозиума "Актуальные вопросы профилактики и лечения гестоза". М. -1998. -С.8-10.
7. Lowry V.H., Rozebrough N.J, Fair A.L., Kandall R. Protein measurement with the Folinphenol reagent. // J. Biol. Chem. -1951. -V. 193, N1. -P.265-275.
8. Spackman D.H., Stein W.N., Moore S. Automatical recording apparatus for use in chromatography of amino acid. // J. Annal. Chem. -1958. -V.30. -P. 190-1205
