Ноотроп Ноопепт: Механизмы ноотропного действия ноопепта
СтатьиПредыдущий раздел | Оглавление | Следующий раздел
МЕХАНИЗМЫ НООТРОПНОГО ДЕЙСТВИЯ НООПЕПТА
1. Специфические места связывания Ноопепта в мозге
Было показано, что связывание [3Н]ГВС-111 с общими мембранами мозга является насыщаемым и обратимым. Мембраны мозга, денатурированные кипячением, не давали специфического связывания ГВС-111. Это свидетельствовало о белковой природе мест связывания. Специфическое связывание было стереоселективным: D-энантиомер ГВС-111 не вытеснял [3Н]ГВС-111, что согласуется с фармакологическими данными об отсутствии ноотропной активности у D-энантиомера. Скетчард-анализ кривой вытеснения меченого ГВС-111, взятого в концентрации 10 нМ, холодным ГВС-111 в интервале концентраций 10-9-10-3М выявил специфические места связывания [3Н]ГВС-111 двух типов: высокоаффинные с Kd=6,85*10-7M и Bmax=1,6 пмоль/мг белка и низкоаффинные с Kd=7,69*10-4M и Bmax=73,2 пмоль/мг белка. Отметим, что полученная величина константы диссоциации высокоаффинного места связывания ГВС-111 находится в соответствии с величиной действующих доз этого ноотропного вещества (0,1-1,0 мг/кг в.б. или 3x10-7- 3x10-6 моль/кг).
2. Основной метаболит Ноопепта совпадает с эндогенным пептидом памяти цикло-пролилглицином. Изучение метаболизма ГВС-111 в условиях in vivo методами газо-жидкостной и высокоэффективной жидкостной хроматографии, а также хромато-масс-спектрометрии показало, что через 1 час после введения препарата (5 мг/кг в/бр) ГВС-111 не обнаруживался в мозгу вплоть до предела обнаружения (0,35 нмоль/г мозга). С помощью ВЭЖХ колонки, откалиброванной синтетическими стандартами, соответствующими возможным метаболитам ГВС-111, в опытных и контрольных образцах ацетонитрильного экстракта мозга были обнаружены пики со временами удерживания, отвечающими фенилуксусной кислоте, линейному пролилглицину и цикло-пролилглицину. Только пик, соответствующий цикло-пролилглицину, изменялся в зависимости от количества введенного ГВС-111.С помощью метода хромато-масс-спектрометрии было показано, что этот пик, действительно, содержит цикло-пролилглицин. Для того, чтобы доказать, что этот цикло-пролилглицин образовался из введенного ГВС-111, а не досинтезировался в организме в ответ на введенный ГВС-111, были изучены продукты энзиматического расщепления ГВС-111 in vitro.
1 мг ГВС-111 был инкубирован с 1 мл плазмы крови или 1 мл гомогената мозга, соответствующего 0,25 мл сырой ткани мозга. С помощью газовой хроматографии было показано, что за 1 час при 37°С содержание цикло-пролилглицина в плазме крови, рассчитанное по площади соответствующего пика, увеличилось в 1,5 раза, а в присутствии мембран мозга в 5 раз по сравнению с контролем. Эти эксперименты подтверждали образование цикло-пролилглицина из ГВС-111 в физиологических условиях. Обнаружение в контрольных образцах экстракта мозга пика, совпадающего по времени удерживания с синтетическим цикло-пролилглицином, свидетельствовало о существовании эндогенного цикло-пролилглицина, который был нами выделен из мозга крыс и его структура была доказана масс-спектрометрически.
Было показано, что цикло-пролилглицин в интервале доз 0,1-1,0 мг/кг в/б обращает вызванную электрошоком амнезию у крыс в тесте УРПИ на 70-80%, что соответствует активности линейных пролинсодержащих аналогов пирацетама по пороговой дозе. Цикло-пролилглицин улучшает также обучаемость животных с исходным дефицитом обучаемости в тесте УРПИ в дозе 1 мг/кг на 23% от максимально возможного эффекта
Мнестическая активность цикло-пролилглицина исследовалась также в тесте «негативного обучения» по его влиянию на привыкание животного к новой обстановке (угашение исследовательского рефлекса).
Таким образом, в этих экспериментах было выявлено два оригинальных молекулярных механизма ноотропного действия Ноопепта: наличие собственных мест узнавания и образование метаболита, совпадающего с эндогенным нейропептидом памяти.
3. Холинопозитивное действие Ноопепта.
Кроме того, была выявлено наличие у Ноопепта холинергического механизма действия. В экспериментах на изолированных нейронах виноградной улитки показано, что ГВС-111 уже в таких низких концентрациях как 10-12М, усиливает выраженность нейронального ответа на микро-ионтофоретическое подведение ацетихолина к нейрону и потенцирует эндогенную пейсмекерную активность. Так как в дополнительной серии экспериментов было установлено, что Ноопепт не влияет на ферменты синтеза и деактивации ацетилхолина, можно полагать его модулирующее влияние на холино-рецепторы.
4. Влияние на систему эндогенных нейротрофинов
Учитывая тесную взаимозависимость холинергической системы и нейротрофических факторов, а также влияние этих двух подсистем на систему амилоидогенеза, представляют интерес также полученные недавно и нуждающиеся в дальнейшем развитии данные о способности Ноопепта повышать концентрацию в мозге нейротрофических факторов, особенно NGF в гиппокампе - отделе мозга, играющем ведущую роль в процессах обучения и памяти.
Предыдущий раздел | Оглавление | Следующий раздел
