Испытание протективной активности обеззараживателя воздуха (генератора диоксида хлора) «Барьерный риф» в отношении вируса гриппа. Заключительный отчет

Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научно-исследовательский институт гриппа» Министерства здравоохранения Российской Федерации, Санкт-Петербург

Введение

С целью оценки протективных свойств обеззараживателя воздуха (генератора диоксида хлора) «Барьерный риф» как средства инактивации возбудителей воздушно- капельных вирусных инфекций было проведено исследование его вирулицидного действия в аэрозольной камере с распыленным вируссодержащим аэрозолем, содержащим вирус гриппа.

Материалы и методы.

Вирусы.
В работе использовали вирус гриппа A/California/07/09 (H1N1)pdm09 из коллекции вирусных штаммов ФГБУ «НИИ гриппа» Минздрава России. Вирус культивировали в течение 48 часов при 36°С в аллантоисной полости 10-12 дневных куриных эмбрионов. В качестве исходного инфекционного материала использовалась аллантоисная жидкость.

Подготовка инфекционного материала.
Вируссодержащую аллантоисную жидкость центрифугировали в течение 30 минут при 4°С и 4000 об./мин. После осаждения фрагментов мембран и крупных контаминирующих частиц надосадок центрифугировали при 36 000g и 4°С в течение 1 часа. Осажденные вирионы ресуспендировали в физиологическом растворе, равном по объему исходному количеству аллантоисной жидкости. Полученная вирусная суспензия имела физические характеристики, близкие к таковым для воды. Это позволило использовать ее для создания аэрозоля, что было затруднительно при использовании аллантоисной жидкости с высоким содержанием белков и, как следствие, большой вязкостью. Для замедления высыхания частиц аэрозоля, приводящего к быстрой потере инфекционной активности, к вирусной суспензии добавляли глицерин до конечной концентрации 5%.

Подготовка обеззараживателя воздуха для тестирования.
Обеззараживатель воздуха (генератор диоксида хлора) «Барьерный риф» извлекали из защитного пакета, выдерживали в течение 1 часа в открытом состоянии и помещали в аэрозольную камеру в воздухонепроницаемый пакет. Момент открывания пакета считали нулевой временной точкой эксперимента.

Исследование защитных свойств обеззараживателя воздуха (генератора диоксида хлора) «Барьерный риф».
3,0 мл суспензии вируса (5×10⁷ EID₅₀/мл) распыляли в течение 10 минут в камере объемом 0,4 м³ с помощью вихревого пневматического генератора аэрозоля типа ВАГ-2, расположенного в центре камеры и обеспечивающего получение аэрозоля с расчетной концентрацией 3,8×10⁴ EID₅₀/л с массовым медианным диаметром частиц 3,6 мкм. Для равномерного распределения аэрозоля в объеме камеры использовали постоянно работающий вентилятор. Система для отбора проб воздуха, включала насос, измеритель скорости потока и микроциклон для улавливания частиц аэрозоля, содержащий 10 мл физиологического раствора.

Отбор проб воздуха в микроциклоны (МЦ) для определения концентрации вируса, находящегося в воздушной фазе объема камеры проводили в течение 2 минут при скорости потока 7,2 л/мин, что приблизительно соответствует режиму дыхания человека. Забор материала проводили в периоды 1-3, 3-5 и 10-12 мин после начала экспозиции обеззараживателя воздуха (генератора диоксида хлора) «Барьерный риф».

В контрольной серии экспериментов те же манипуляции проводили в отсутствии изучаемого обеззараживателя воздуха (генератора диоксида хлора) «Барьерный риф».

Титрование инфекционной активности вируса.
Аликвоты физиологического раствора отбирали из микроциклонов и готовили из них серию десятикратных разведений на фосфатном буфере. 10-12 дневные куриные эмбрионы заражали серийными десятикратными разведениями вирусного материала от 100 до 10-6 по 0,2 мл на эмбрион и инкубировали в термостате при 36°С в течение 48 часов. По окончании срока инкубации эмбрионы охлаждали, вскрывали и переносили аллантоисную жидкость (0,1 мл) в лунки планшета для иммунологических реакций, после чего добавляли равный объем 1% куриных эритроцитов физиологическом растворе.

Уровень репродукции вируса в эмбрионах оценивали по реакции гемагглютинации (РГА) эритроцитов. За титр вируса принимали величину, обратную наибольшему разведению вируса, способного вызвать положительную реакцию гемагглютинации и выражали в логарифмах 50% инфекционной дозы вируса (lg ID₅₀). На основании полученных результатов на каждом сроке эксперимента оценивали эффективность инактивации – снижение титра вируса в % от контроля.

Статистическую обработку результатов оценки активности проводили с помощью U-критерия Манна-Уитни. Различия считали значимыми при р<0,05.

Результаты

Данные по титрованию проб воздуха на инфекционную активность вируса гриппа суммированы в табл. 1 и на для наглядности представлены на рис.1.

Таблица 1.
Инактивирующая активность обеззараживателя воздуха (генератора диоксида хлора) «Барьерный риф»
в отношении вируссодержащего аэрозоля.

Рис.1. Инфекционная активность вируса гриппа в аэрозоле
в условиях экспозиции с обеззараживателем воздуха
(генератором диоксида хлора) «Барьерный риф».

Как следует из представленных данных, титр вируса в аэрозоле в начале эксперимента составлял 3,0 lg ID₅₀/0.2 мл, что примерно на порядок ниже, чем следует из расчетных данных. Такое падение инфекционной активности вируса следует объяснять его инактивацией при высыхании частиц аэрозоля, негативно влияющем на биологические свойства вирионов.

С течением времени от 1 до 10 мин эксперимента отмечалось некоторое снижение инфекционной активности вируса в составе аэрозоля, что можно объяснить коагуляцией его частиц и последующей их седиментацией, что приводит к снижению количества инфекционного вируса в воздушной фазе. Тем не менее, на каждом из этапов эксперимента воздействие обеззараживателя воздуха (генератора диоксида хлора) «Барьерный риф» снижало инфекционный титр вируса на 1-2 порядка. При 10-минутной экспозиции инфекционный вирус в воздухе не обнаруживался вообще.

Таким образом, в условиях аэрозольной камеры применение обеззараживателя воздуха (генератора диоксида хлора) «Барьерный риф» приводит к инактивации вируса гриппа в составе аэрозоля.

Комментарии