Пегилированные лекарственные препараты: современное состояние проблемы и перспективы
Статьи Опубликовано в:Вирусные гепатиты: Достижения и перспективы
Информационный бюллетень
И. Г. Никитин, Т.Н. Сторожаков, Российский государственный медицинский университет, кафедра госпитальной терапии N 2 лечебного факультета
История применения лекарственных средств насчитывает, вероятно, столько же времени, сколько существует человеческая цивилизация как понятие. От периода наскальной живописи первобытных людей до настоящего времени человеческий интеллект настойчиво демонстрирует осознанную необходимость вмешательства в болезнь посредством применения лекарственных средств, арсенал которых составляют уже не только травы и минералы, но и антибиотики, противоопухолевые препараты, белки, цитокины, требующие высочайших интеллектуальных и материальных затрат на свое производство. И какое бы средство ни применялось для лечения того или иного заболевания, логично стремление и врача, и пациента к максимальной эффективности применяемого препарата и его минимальным побочным эффектам. Пути повышения клинической эффективности лекарственного вещества могут быть различными: это изменение его химической структуры, соединение с другими препаратами, способными усилить или, наоборот, ослабить действие основного препарата. Особую проблему в этом смысле составляют препараты белковой или пептидной структуры (интерфероны, гормоны, факторы роста, цитокины, тромболитики), поскольку принципиальное изменение структуры их молекулы как химического понятия либо нивелирует их биологические свойства, либо влечет за собой увеличение побочных эффектов, связанных с их применением. Кроме того, лечение нативными препаратами пептидной структуры имеет ряд существенных недостатков: белки быстро гидролизуются в гастроинтестинальном отделе пищеварительного тракта и поэтому используются, как правило, парентерально. Относительно короткий период "естественной" полужизни таких препаратов в организме пациента предусматривает их многократное использование для достижения требуемого терапевтического воздействия. Еще одним важным негативным фактором, ограничивающим применение нативных или рекомбинантных белковых препаратов, является их высокая иммуногенность и связанные с ней сенситивные реакции.
Одним из путей повышения эффективности лекарственных препаратов белковой структуры является химическая модификация их молекулы, состоящая не в собственно изменении их структуры, а в физико - химической трансформации, достигаемой соединением нативной молекулы с полиэтиленгликолем (ПЭГ). Данный процесс соединения нативной молекулы лекарственного препарата с ПЭГ получил название "пегилирование". Подобная химическая модификация фармакологических препаратов пептидной структуры адресно направлена на улучшение их переносимости, снижение иммуногенности, повышение периода их полужизни, и как следствие всего перечисленного, на значительное повышение качества жизни в процессе проведения лечения.
ПЭГ в качестве потенциального объекта - модификатора веществ пептидной структуры привлек внимание исследователей еще в начале 1970-х годов. В настоящее время ПЭГ одобрен Обществом по питанию и лекарственным препаратам США (FDA) в качестве субстанции, разрешенной к использованию в медицине (производство лекарственных препаратов), продуктах питания и косметологии. Молекулы ПЭГ - это водорастворимые полимеры окиси этилена с двумя терминальными гидроксильными группами, они (молекулы) могут иметь различную молекулярную массу и стереохимическую структуру. Молекулярный вес молекул ПЭГ может колебаться в пределах 300 - 4000 Дальтон, а выстроенные в цепи макромолекулы ПЭГ могут формировать как разветвленную, так и линейную стереохимию. Именно масса ПЭГ и его стереохимическая структура, как правило, определяют принципиальные свойства будущего модифицированого пептидного субстрата.
ПЭГ может быть связан с протеином в нескольких позициях, но некоторые из них являются премированными, так, например, наиболее часто ковалентное соединение с белком (интерферон альфа-2Ь) происходит преимущественно в месте атома азота Е - аминогруппы лизина или в месте имдазольной группы гистидина. Такие связи позволяют активировать гидроксильные группы ПЭГ и выстроить молекулу, в которой целевые места имеют ковалентные связи. Кроме того, прямые ковалентные связи ПЭГ в месте положения лизина и аргинина (карбоксильные концы) напрямую препятствуют расщеплению модифицированных молекул трипсином.
Еще один из важнейших ресурсов модифицированных ПЭГ - молекул - высокая гидрофильность, формирующая принципиально новые физико-химические свойства измененного пептида. Высокое содержание атомов водорода даже в одной молекуле ПЭГ позволяет ей связываться с 2 - 3 молекулами воды. Подобный эффект влечет за собой формирование "водного облака" вокруг модифицированной молекулы "ПЭГ - белок", за счет чего значительно повышается ее гидродинамический радиус.
Этот своеобразный "щит" воды вокруг модифицированной молекулы с одной стороны значительно повышает растворимость и биодоступность препарата, с другой - защищает молекулу от других белков (нейтрализующие антитела, комплемент). Таким образом ПЭГ - модифицированные пептиды значительно более защищены от опсонизации и активного фаго- и эндоцитоза клеточных структур макроорганизма. Наиболее часто для связи пептидных молекул используется монометоксиполиэтиленгликоль, его молекула имеет одну гидроксильную группу, с которой и происходит связывание белка, другие концы молекулы данной молекулы ПЭГ содержат нереактогенные метильные группы. Примеры формирования возможных связей ПЭГ с молекулами пептидной структуры представлены на рисунке 1.
Рис. 1. Типы связей молекулы белка с полиэтиленгли-^лем
А. Прямая, длинная цепь ПЭГ (высокая молекулярная масса), соединение с пептидом в одном положении
Б. Прямая, короткая цепь ПЭГ (низкая молекулярная масса), соединение с пептидом в одном положении
В. Множество коротких прямых цепей ПЭГ (низкая молекулярная масса), соединение с пептидом в нескольких положениях
Г. Длинные разветвленные цепи ПЭГ (высокая молекулярная масса), соединение с пептидом в одном положении
Таблица 1 Влияние пегилирования на период полужизни нативных белков
|
Белок |
Субстрат |
Период полу - жизни (часы) |
Кратность |
|
|
Аденозиндеаминаза |
мышь |
0.5 |
28 |
56 |
|
Аспарагиназа |
человек |
20-72 |
357 - 528 |
7.3 - 17.7 |
|
Интерферон |
человек |
4 |
40 |
10 |
|
Интерлейкин - 2 |
крыса |
0.05 |
0.32 |
6.4 |
|
Стрептокиназа |
мышь |
0.07 |
0.33 |
4.7 |
|
Супероксиддисмутаза |
человек |
0.42 |
204 |
486 |
|
Уриказа |
человек |
<3 |
8 |
>2.7 |
Изменения фармакокинетических и фармакодинамических свойств ПЭГ - модифицированных пептидов зависят как от массы молекулы ПЭГ, так и от специфических мест связи. Так, например, продемонстрирована прямая корреляция между массой молекулы ПЭГ и периодом полу - жизни собственно пептида. В таблице 1 приведены сравнительные данные периода полужизни некоторых биологически активных нативных пептидов и их ПЭГ - коньюгатов. В основном более длинные цепи ПЭГ обуславливают большую продолжительность периода полужизни коньюгата "ПЭГ - пептид" и его фармакологическую стабильность. Еще одним важным фактором, влияющим на фармакодинамику и фармакокинетику ПЭГ - модифицированных пептидов, является структура ПЭГ - цепочек: разветвленная молекула ПЭГ формирует замедление активного метаболизма препарата, что также влечет за собой удлинение времени активной циркуляции препарата. С разветвленной структурой цепочек ПЭГ связана также и значительно меньшая иммуногенность модифицированных препаратов при сохранении их основных фармакологических свойств. Подобные эффекты могут быть достигнуты и другим путем - связыванием пептида, например, не одной, а несколькими молекулами ПЭГ, имеющими при этом линейную структуру цепочек. Хорошо изученным примером в этой связи является молекула интерлейкина - 2 (ИЛ - 2). Так как молекула ИЛ - 2 очень мала, последняя свободно фильтруется через почки и имеет очень короткий период полужизни. Соединение ИЛ - 2 с ПЭГ, имеющей молекулярную массу менее 20 kDa, практически никак не влияет на фармакодинамику белка, но повышение молекулярной массы ПЭГ до 60 -70 kDA уже значительно замедляет фильтрацию коньюгата "ПЭГ - ИЛ - 2" и увеличивает его время полужизни и биологическую доступность. Говоря о специфических местах связи ПЭГ с пептидом, следует подчеркнуть, что наиболее прочные связи по отношению к возможному протеолизу (чаще всего трипсином) формируются, если связывание пептида с ПЭГ происходит в месте гистидина.
Таблица 2
ПЭГ - модифицированные пептиды, одобренные для клинического использования и проведения дальнейших клинических испытаний (FDA USA, 2000)
|
ПЭГ - коньюгат |
Клинический статус |
Область применения |
|
L - аспарагиназа |
Одобрено к практическому |
Острый лимфобластный |
|
Аденозиндеаминаза |
Одобрено к практическому |
Иммунодефицитные |
|
Супероксиддисмутаза |
III фаза испытаний |
Недостаточность |
|
Интерферон - альфа2Ь |
Одобрено к практическому |
Хронический гепатит С |
|
Эритроциты |
I/I I фаза испытаний |
Хронические |
|
sTNF- RI |
I/II фаза испытаний |
Ревматоидный артрит, |
|
Липосомальный |
I/II фаза испытаний |
Химиотерапия солидных |
|
Уриказа |
I/II фаза испытаний |
Индуцированная |
|
Интерлейкин - 2 |
I/II фаза испытаний |
Гипернефроидный рак |
|
Каталаза |
Преклиническии этап |
Ожоги, травмы |
|
Билирубиноксидаза |
Преклинический этап |
Хронические |
|
Стрептокиназа |
Преклиническии этап |
Тромболитическая |
|
t-PA |
Преклинический этап |
Тромболитическая |
|
Гемоглобин |
Преклинический этап |
Перфузия при органной |
|
Гранулоцитарный / |
Преклинический этап |
Гипоплазия костного |
В таблице 2 приведены данные о ПЭГ - модифицированных соединениях пептидной структуры, разрешенных FDA как к практическому применению в медицинской практике, так и в продолжающихся клинических испытаниях. Как следует из таблицы, современные технологии пегилирования биологически активных пептидных молекул привели к значительному расширению области их настоящего и будущего практического применения. Появление ПЭГ - модифицированных пептидов позволило сформировать ряд фармакодинамических и фармакокинетических эффектов, появление которых ранее для конкретного пептида было практически недостижимой мечтой. Ярким примером тому могут служить результаты уже проведенных клинических испытаний с ПЭГ - эритроцитами, ПЭГ - интерфероном альфа-2b, ПЭГ - аденозиндеаминазой, ПЭГ - растворимым рецептором некротизирующего фактора опухолей - альфа.
ПЭГ - эритроциты. Переливание эритроцитов крови человека - достаточно частая процедура в самых различных областях медицины, и все же наибольший интерес в этой связи представляет группа пациентов, получающих трансфузии эритроцитов в хроническом режиме, - пациенты с серповидноклеточной анемией/талассемией, пациенты, находящиеся на гемодиализе по поводу хронической почечной недостаточности. Очевидно, что данная группа пациентов в наибольшей степени подвержена внешней антигенной агрессии и риску формирования аллоиммунизации, связанной с хроническими гемотрансфузиями. Помочь разрешить данную проблему и было призвано создание и клиническое испытание ПЭГ - модифицированных эритроцитов. Физико - химическая структура ПЭГ, связанная с его вязкостными свойствами, высокой стабильностью молекулы, гидродинамическими параметрами, позволила создать высокоэффективный коньюгат с эритроцитами. Короткие и линейные цепи ПЭГ в эксперименте позволили "закрывать" Rh - фактор и другие поверхностные антигены эритроцита, а длинные цепи способствовали блокированию адгезии эритроцитов между собой и эндотелием сосудов. Кроме того, длинные цепи ПЭГ препятствовали собственно повреждению эритроцитов и их деформации в сосудистом русле. Разветвленные же цепи ПЭГ с плотными ареактогенными зонами блокировали связывание внешних антител и интенсивность их продукции в отношении вводимых извне эритроцитов. Таким образом, очевидной стала необходимость создания ПЭГ - модифицированных эритроцитов, где бы присутствовали и линейные и разветвленные цепи ПЭГ. Полученные таким путем ПЭГ - эритроциты продемонстрировали свою высокую эффективность и на животных моделях, и в четырех независимых исследованиях на людях, при этом кинетика доставки кислорода модифицированных эритроцитов не отличалась от обычных клеток. Кроме того, ни в одном из проведенных независимых исследований на людях не было отмечено никаких побочных эффектов, обычно сопутствующих гемотрансфузиям, при этом достоверно улучшались показатели общей гемодинамики, более продолжительной была кислородотранспортная функция клеток, значительно улучшались показатели реологических параметров. Исследования с ПЭГ - эритроцитами в настоящее время еще продолжаются, отрабатывается профиль безопасности, эффективность дозы, но, что особенно важно, - данные исследования закладывают фундамент в создание других ПЭГ - модифицированных клеток крови, которые найдут практическое применение по таким позициям, как "трансплантант против хозяина", иммунокомпрометированные пациенты.
ПЭГ - растворимый рецептор некротизирующего фактора опухолей альфа. Некротизирующий фактор опухолей альфа (TNFa) - действующий цитокин, продуцируемый макрофагами и другими клетками крови, который играет существенную роль в поддержании нормальной функции иммунной системы. В дополнение к стимулированию выработки других цитокинов TNFa регулирует опосредованно цитокиновый каскад, являясь причиной воспаления и местной деструкивной реакции, например, при ревматоидном артрите. В этом случае действие TNFa опосредуется через рецепторное представительство, локализованное на макрофагах и других структурах синовиальной оболочки. Воспалительный сигнал TNFa модулируется двумя субтипами растворимых рецепторов (p55/sTNF - RI, p75/sTNF - RII) на поверхности клеток, при этом sTNF - RI - тип рецепторов выступает в роли естественного ингибитора TNFa. sTNF - RI продемонстрировал высокое сродство к TNF - а, а также была выявлена прямая корреляция между содержанием sTNF -RI и клинко - морфологической активностью ревматоидного артрита. Данное обстоятельство и послужило поводом для инициации исследований по возможному созданию ПЭГ - коньюгированной формы sTNF - RI для перспективного применения при ревматоидном артрите, а также болезни Крона, неспецифическом язвенном колите. sTNF - RI был клонирован и изолирован с помощью рекомбинантной ДНК - технологии и сцеплен с высокомолекулярным ПЭГ. Предварительные результаты доклинических исследований данной формы препарата продемонстрировали высокую эффективность при ревматоидном артрите и болезни Крона, при этом отмечены хорошая переносимость препарата, практическое отсутствие токсических эффектов и минимальная его иммуногенность. Кроме того, использование ПЭГ - sTNF - RI при хронических воспалительных заболеваниях в продолжающихся клинических испытаниях показало, что препарат обладает высоким профилем безопасности при парентеральном использовании три раза в неделю, а его фармакологические эффекты могут быть усилены и средствами базисной противовоспалительной терапии, например, индометацином.
Рис. 2. Фармакокинетический профиль стандартного и пегилированного интерферона альфа-2Ь
Пегинтерферон альфа-2Ь (ПегИФН альфа-2b, Шеринг Плау, США). Противовирусная терапия - еще одна область перспективного использования пегилированных препаратов пептидной структуры. К примеру, интерферон альфа-2Ь (ИФН альфа-2b, Шеринг Плау, США), индуцирует подавление репликации вирусных ДНК или РНК, что и определило его широкое применение при лечении хронических вирусных гепатитов В и С. Однако при традиционной терапии интерфероном - альфа хронического гепатита С, где пока препарату нет альтернативы даже при использовании схем комбинированного лечения, частота стойкого ответа на терапию отмечается в меньшем проценте случаев, чем того хотелось бы врачу и пациенту. Отчасти подобная ситуация связана не только с кинетикой самого вируса, но и с фармакокинетикой интерферона - альфа. Традиционный режим введения интерферона - альфа - 3 млн.МЕ х 3 раза в неделю, при этом следует отметить, что максимальная концентрация препарата после подкожного введения определяется в пределах 8-12 часов, период его полужизни в среднем составляет 6 часов. При этом очевидно полагать, что наряду с периодами стабильной концентрации препарата существуют и периоды, где его уровень в сыворотке крови и биологических тканях может снижаться практически до неопределяемых значений. Логично предположить, что для достижения приемлемого терапевтического уровня нативного интерферона - альфа, вводимого извне, необходимо принципиальное изменение параметров его фармакокинетики и фармакодинамики. Такая постановка вопроса предопределила создание принципиально новой лекарственной формы интерферона альфа-2Ь в соединении с ПЭГ. Данный препарат уже прошел все необходимые клинические испытания и зарегистрирован к применению во всех ведущих европейских странах (в том числе и России) и США под коммерческим названием ПегИФН альфа-2b. На рисунке 2. представлены основные параметры фармакокинетики двух препаратов: нативного интерферна альфа-2Ь и пегилированного его коньюгата ПегИФН альфа-2b. Очевидно, что ПегИФН альфа-2b имеет значительно лучший биологический профиль, нежели интерферон альфа-2Ь; это выражается значительным повышением периода полужизни пегилированого аналога, снижением его иммуногенных свойств. Присоединение относительно небольшой молекулы ПЭГ молекулярной массой 12 kDa к интерферону in vivo продемонстрировало, что максимальная концентрация белка при использовании такого коньюгата достигается через 15-44 часа и сохраняется в течение 48-72 часов. Таким образом, период "эффективной" полужизни препарата составляет в среднем около 40 часов! Замедление клиренса ПегИФН альфа-2b (в связи с присоединением молекулы ПЭГ) из плазмы обеспечивает циркуляцию его в крови в течение недели. Именно такие фармакокинетические и фармакодинамические параметры препарата обеспечивают реально заведомо более высокую эффективность ПегИФН альфа-2b по сравнению со стандартным интерфероном альфа-2Ь. Кроме того, молекулярная масса ПЭГ - 12 KDa обеспечивает препарату не только печеночный, но и почечный клиренс. Еще одно принципиально важное преимущество ПегИФН альфа-2b перед рекомбинантным интерфероном альфа - возможность его использования при циррозах печени, ведь именно эта категория пациентов обычно была лишена возможности проведения полноценной противовирусной терапии. Особенность строения молекулы ПегИФН альфа-2b за счет ее относительно небольших размеров и линейности позволяет использовать препарат и у больных с хроническим гепатитом С на морфологической стадии цирроза, поскольку препарат не требует для полноценного выведения высокосохранной почечной гемоперфузии. Кроме того, введение препарата 1 раз в неделю не может не сказываться и на качестве жизни пациента, получающего противовирусное лечение. Проведенные клинические испытания ПегИФН альфа-2b продемонстрировали его явные преимущества перед интерфероном альфа при лечении хронического гепатита С и как средства монотерапии, и, особенно, в схемах комбинированного лечения с использованием Рибавирина. Таким образом, для ПэгИФН альфа-2b характерен баланс между противовирусной активностью и длительным периодом полувыведения, позволяющим назначать препарат один раз в неделю, а также эффективно выводить метаболиты ПЭГ из организма.
ПЭГ - аденозиндеаминаза. Впервые этот естественный энзим был применен в конце 1980-х годов для лечения детей с различными вариантами иммунодефицитов - пациентам, перенесшим трансплантацию костного мозга и других органов и тканей, облученным донорам эритроцитов. Аденозиндеаминаза при использовании на практике очень быстро метаболизируется и свободно выводится почками. Доклинические исследования в эксперименте продемонстрировали, что связывание, например, коровьей аденозиндеаминазы с низкомолекулярными цепями ПЭГ до 10 - 16 kDa вызывает значительное повышение времени полужизни пептида - от нескольких минут до 24 часов, и что особенно важно, при этом происходило также значительное снижение иммуногенности препарата. Клинические результаты с генноинженерной аденозиндеаминазой в составе ПЭГ - коньюгата продемонстрировали, что период полужизни при сохранении всех биологических эффектов аденозиндеаминазы составляет от 48 до 72 часов при введении препарата еженедельно внутримышечно. Данный режим введения коньюгата "ПЭГ - аденозиндеаминаза" позволяет добиться концентрации аденозиндеаминазы в сыворотке крови в три раза выше по сравнению со здоровыми детьми. Использование ПЭГ - аденозиндеаминазы в шести независимых контролируемых рандомизированных исследованиях продемонстрировало хороший профиль безопасности препарата, при этом значительно интенсивнее сокращались случаи развития оппортунистических инфекций, быстрее завершались программы интенсивной реабилитации; ни одного случая токсических реакций или других серьезных нежелательных явлений при этом выявлено не было.
ПЭГ - модификация пептидных препаратов, предопределившая серьезные изменения в результаты лечения, наметила сегодня большие перспективы при таких заболеваниях, как ферментные дефициты, лейкемия, хронические воспалительные заболевания, онкология, хронические вирусные инфекции, кардиоваскулярная патология. Пегилирование лекарственных препаратов пептидной структуры имеет ряд весомых и несомненных преимуществ, которые ранее были просто невозможны при использовании нативных аналогов: усиление биологической активности, удлинение периода "эффективной" полужизни, замедление выведения, отсутствие пиков плазменной/тканевой концентрации, понижение токсичности и иммуногенности. Однако было бы неверным считать, что пегилирование - это только позитивный результат, а ПЭГ -коньюгаты имеют одни только преимущества перед нативными пептидами. К основным недостаткам ПЭГ - коньюгированных пептидов, используемых и в качестве уже разрешенных лекарственных форм, и в продолжающихся клинических испытаниях, можно отнести: возможное уменьшение активности белка, связанное с выбором "неправильного" размера или структуры ПЭГ; с этой же причиной может быть связано и возможное удлинение элиминации пептида. Так или иначе, полученные результаты уже проведенных и продолжающихся клинических испытаний с ПЭГ - модифицированными препаратами белковой структуры, а также экспериментальные данные свидетельствуют о явном преимуществе коньюгированных аналогов по сравнению с нативными пептидами. Само же направление создания и использования ПЭГ - модифицированных белков без преувеличения можно считать новацией, окончательные возможности которой еще предстоит оценить специалистам самых разных направлений медицинской науки.
Литература:
1. Boyer n., Marcellin P. - Pathogenesis, diagnosis and management of hepatitis C. - J. Hepatol. 2000; 32 (Suppl): 98 -112
2. Вruсе А. - Clinical considerations in pegylated protein therapy. - From Reserch to Practice. - 2001; 3(1): 3-9
3. Bennet С. L. - Preliminary comparisons of oncologists/hematologists support for erythropoetin versus G/GM - CSF use: potential impact of direct to consumer (DTC) advertising. - Blood. 2000; 96: 847a
4. Delgado С., Francis G. e., Fisher D. - The uses and properties of PEG - linked proteins. - Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Syst. 1992; 9(3, 4): 249 - 304
5. Edvards С. К. - PEGylated recombinant human soluble tumor necrosis factor receptor type I (r - HU - sTNF - RI): novel high affinity TNF receptor designed for chronic inflammatory diseases. - Ann. Rheum. Dis. - 1999; 58 (Suppl I): 173-181
6. Gabizon A., Martin F. - Polyethylene glycol - coated (pegylated) liposomal doxorubicin. - Drugs. - 1997; 54 (Suppl 4): 15-21
7. Glue P., Fang J., Sabo R et al. - Peg - interferon - alfa2b: pharmacokinetics, pharmacodynamics, safety and preliminary efficacy data. - Hepatology. - 1999; 30 (Suppl): 189
8. Glue P., Rouizer - Panis R., Raffanel С et al. - A dose ranging study of pegylated interferon - alfa2b and ribavirin in chronic hepatitis C. The Hepatitis С Intervention Therapy Group. - Hepatology - 2000; 32(3): 674 - 653
9. Hershfield M. S., Buckley R. H., Greenberg M. Let al. -Treatment of adenosine deaminase deficiency with polyethylene glycol - modified adenosine deaminase. - N. Engl. J. Med.-1987; 316: 589-596
10. Jensen - Pippo К. E., Withcomb К. L., De Prince R. В et al. - Enteral bioavailability of human granulocyte colony stimulating factor conjugated with polyethylene glycol. -Pharm. Res. - 1996; 13:2-7
11. Knauf M. J., Bell D. P., Hirtzer P et al. - Relationship of effective molecular size to systemic clearance in rats of recombinant interleukin - 2 chemically modified with water - soluble polymers. - J. Biol. Chem. - 1988; 263: 15064 -15070
12. Loadman P. Y, Bibby M. C., Double J. A et al. -Pharmacokinetics of PC1 and doxorubicin in experimental colon tumor models with differing responses to PC 1. - Clin. Cancer Res. - 1999; 5: 3682 - 3688
13. MacDougall I. C., Gray S. J., Elston 0 et al. -Pharmacokinetics of novel erythropoiesis stimulating protein compared with epoetin - alfa in dialysis patients. - J. Am. Soc. Nephrol. - 1999; 10: 2392 - 2395
14. Muggia F. - The Benefits of pegylation in cancer and antiviral therapy. - From Research to Practise. - 2001; 3(1): 1 -3
15. Northfeld D. W„ Dezube В. J., Thommes J. A et al. -Pegylated - liposomal doxorubicin versus doxorubicin, bleomicin and vincristine in the treatment of AIDS - related Kaposhi's sarcoma: results of a randomized, phase 111 clinical trial. - J. Clin. Oncol. - 1998; 16: 2445 - 2451
16. Reddy R. - Controlled - release, pegylated, liposomal formulations: new mechanisms in the delivery of injectable drugs. - Ann. Pharmacol. - 2000; 34: 915 - 923
17. Roberts M. J., Harris M - Attachment of degradable poly(ethylene glycol) to proteins has the potential to increase therapeutic efficacy - J. Pharmaceut. Sci. - 1998; 87 (II): 1440-1445
18. Scott M. D., BradleyA. J., Murad K. L - Camouflaged blood cells: low - technology bioengineering for transfusion medicine? - Transfus. Med. Rev. - 2000; 14 (1); 53 - 63
19. Wang Y. S., Youngster S., Bausch J et al. - Identification of the major positional isomer of pegylated interferon -alfa2b. - Biochemistry. - 2000; 39: 10634 - 10640
20. Zeuzem S., Feinman S. V., Rasenack J. et al. -Peginterferon - alfa2a in patients with chronic hepatitis С. -N. Engl. J. Med. - 2000; 343 (23): 1666 - 1672
